摘要:

摘要:

摘要:结直肠癌(colorectal cancer, CRC)因发病率和死亡率居高不下，且带来沉重的经济医疗负担而备受广泛关注。近年来，肠道微生物在结直肠癌预防、诊断及治疗过程中的关键作用逐渐受到人们广泛重视，为晚期疾病管理带来了希望。本文全面回顾了肠道微生物群在结直肠癌发病与进展中的作用及其潜在机制，并探讨了肠道微生物群在晚期结直肠癌全身系统治疗中的应用潜力，提出新策略和新见解，以改善晚期结直肠癌的诊断与治疗方法。

摘要:子宫内膜异位症是一种慢性、雌激素依赖性妇科疾病，常伴随盆腔疼痛、性交痛、排便和排尿困难以及不孕等症状。该病治疗难度大且复发率高，给患者带来巨大困扰，同时对社会和经济造成显著影响。目前，子宫内膜异位症的发病原因尚不十分清楚，且由于缺乏特异性的生物标志物，早期诊断存在困难。随着高通量测序技术的进步，人体微生物组研究取得了显著进展，揭示了人体微生物与疾病之间的密切联系，发现女性口腔、生殖道、腹腔及肠道微生物群与多种妇科疾病的发生发展密切相关。本文针对子宫内膜异位症，综述其与人体微生物组的相关性，并探讨微生物在子宫内膜异位症诊断和治疗中的潜在应用。

摘要:根结线虫是危害最为严重的植物寄生线虫之一，对全球农业生产造成了严重威胁。植物根系微生物组作为植物的“第二基因组”，在植物生长发育和逆境响应中发挥着不可替代的作用。根结线虫侵染会显著扰动根系微生物群落的结构与功能平衡，这一过程不仅会加剧植物病理进程，还可能通过微生物-植物-线虫三方互作形成级联效应。本研究系统阐述了根结线虫寄生对宿主植物根系微生态系统的多重影响，重点分析了植物根际和内生微生物群落的结构与功能特性变化，以及这些变化在线虫病发生和维持植物健康中的作用。在群体水平上探讨病原线虫与植物微生物组间的相互作用机制，不仅有助于揭示植物-病原物-微生物三者间的互作网络，更好地阐释线虫病的发生机制，更为创新性植物线虫病害防控技术的研发提供了理论依据和实践指导。

摘要:酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)是由于长期过量饮酒所致的肝脏疾病，是全球最常见的慢性肝病之一。目前尚无有效治疗方法来阻止或逆转该病，造成了严重的社会负担，其防治压力不断增大。近年来，学者们发现长期酗酒会导致肠道菌群结构和功能的显著改变，从而破坏肠道菌群的平衡，而肠道菌群的失调则会推动酒精性肝病的进展。因此，在一定程度上维持肠道菌群稳态可为该病的预防和治疗提供新的靶点。本文主要综述近年来肠道菌群及其代谢产物与酒精性肝病的研究及干预治疗进展，为今后研究其发病机制及治疗提供参考。

摘要:目前，全球农业可持续发展面临土壤退化、资源限制和环境污染等多重压力。随着人口持续增长，以及对粮食品质需求的不断提高，提升土壤健康水平已成为保障粮食安全的重要基础。虽然化肥在保障植物高产优质方面发挥着重要作用，但其过量或不合理使用会造成土壤酸化、水体富营养化等环境问题。植物根际有益微生物在宿主养分吸收、胁迫耐受性以及适应环境变化过程中发挥着重要作用。其中，合成菌群(synthetic microbial communities, SynComs)是通过定向设计功能明确、遗传背景清晰的多个微生物组合，从而实现单一菌株无法完成的复杂功能。它是破解植物-土壤-微生物关键界面互作机制的有力工具，在植物养分高效利用、抗逆性提升和化肥减量增效等方面发挥着关键作用。本文分析了SynComs的概念演化以及当前的研究态势，系统阐述了其构建原则、方法及技术工具，并从促进植物生长、抵抗生物和非生物胁迫、改善和恢复土壤健康等方面，概述了SynComs在农业可持续发展中的作用。最后，展望了未来的研究方向，应重视靶向型菌剂的研发、人工智能(artificial intelligence, AI)技术在群落构建中的应用，以及提高SynComs在田间应用的效果，为利用近自然微生物手段解决粮食安全、资源高效利用和环境保护的多目标协同发展问题提供支撑，进而推动我国农业绿色发展。

摘要:环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是一种快速、灵敏的核酸等温扩增方法，具有良好的特异性和敏感性，在核酸检测领域具有广阔的应用前景。然而，基于LAMP的检测方案开发也面临一些问题，例如在扩增过程中会出现非特异性和非模板扩增等情况，进而影响检测结果的准确性和特异性。本文阐述了近年来LAMP开发过程中在规避假阳性、提升检测效果等方面的研究进展，包括引物设计、优化条件、引入特殊化学物质等策略，并探讨了LAMP在检测领域的应用突破与创新。

摘要:SnoaL家族蛋白属于核转运因子2 (nuclear transport factor 2, NTF2)样超家族，具有特征性的α+β折叠桶状结构。近年来研究发现该家族蛋白具有丰富的催化功能，能够催化羟醛缩合、羟化、脱羧、水解以及环加成等多种反应，在多种复杂结构活性天然产物的生物合成中发挥着重要作用。尽管这一家族蛋白广泛分布于细菌、真菌等生物体中，但目前针对该家族蛋白的研究还相对较少。本文通过系统综述SnoaL家族蛋白的研究进展，不仅能为后续相关蛋白的功能鉴定和机制研究提供参考，同时也有助于发现新颖的生物催化工具，为生物活性分子的合成生物学研究奠定基础。

摘要:作为中国传统酿酒工艺的核心糖化剂，大曲凭借其复杂的微生物群落和多功能酶系在白酒生产中发挥着不可替代的作用。本文概述了东西方酿酒工业中糖化剂的应用场景与特点，进而基于微生物学、基因组学和蛋白质组学等方面的研究重点阐述了大曲在糖化功能微生物及酶多样性、糖化机制等方面的特性，并提出了运用多组学技术揭示大曲在酿酒过程中的功能机制、深化机理研究与生产实践相结合等策略，为酿酒工业中糖化剂的创新发展提供了参考。

摘要:目的 利用基因组尺度代谢网络模型指导大肠杆菌的遗传修饰，构建可积累丙酮酸的突变株。 方法 以基因组规模的代谢网络模型为指导，模拟大肠杆菌丙酮酸的积累过程，筛选代谢途径中的关键基因，并确定基因编辑策略。具体敲除乙酸激酶基因 ackA、磷酸乙酰转移酶基因 pta、乙醇脱氢酶基因 adhE、糖原合成酶基因 glgA、糖原磷酸化酶基因 glgP、磷酸戊糖焦磷酸(PRPP)合酶基因 prs、核糖1,5-二磷酸磷酸激酶基因 phnN和转运蛋白编码基因 proP；敲入转运蛋白编码基因 ompC、类黄酮毒素基因 fldA和 d-丝氨酸氨裂解酶基因 dsdA。 结果 基因编辑突变株MG1655-6-2在厌氧条件下进行摇瓶发酵，丙酮酸产量达10 .46 g/L，转化率为0 .69 g/g。代谢组分析表明，发酵液中丙酮酸水平显著升高，某些相关代谢副产物显著降低。通过5 L补料分批发酵和适应性实验室进化，该菌株的最终丙酮酸产量达到45.86 g/L。 结论 本研究证实了一种基因编辑策略的有效性，即基于基因组规模的代谢网络模型预测的基因编辑策略，可在厌氧条件下提高大肠杆菌丙酮酸产量，为微生物代谢工程提供了有价值的参考。

摘要:目的 轮状病毒(rotavirus, RV)是婴幼儿急性脱水性胃肠炎的主要病原体，目前尚无特效治疗药物，预防性疫苗接种是控制感染的有效手段之一。本研究以RV受体结合域viral protein 8^* (VP8^*)为靶点，选取其功能区域片段?VP8^* (第65-223位氨基酸)，构建单链二聚体?VP8^*-sc-dimer。采用pET-30a(+)载体在原核系统中表达并纯化该重组蛋白，评估其免疫原性和诱导中和抗体的能力，为开发安全有效的RV亚单位疫苗提供科学依据。方法 通过基因合成获得?VP8^*-sc-dimer序列，运用同源重组技术将其导入pET-30a(+)原核表达载体。将纯化的重组蛋白与佐剂AddaVax混合后，肌内注射6-7周龄BALB/c小鼠。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中?VP8^*特异性抗体滴度，通过病毒中和试验评估免疫血清的中和活性。结果 成功表达并纯化了?VP8^*-sc-dimer重组蛋白，纯度约为90%；ELISA结果显示，?VP8^*组和?VP8^*-sc-dimer组接种后均诱导产生了?VP8^*特异性抗体，且?VP8^*-sc-dimer组抗体滴度显著高于?VP8^*组。病毒中和试验表明，2组免疫血清均可中和RV Wa株，其中?VP8^*-sc-dimer组的中和抗体滴度显著更高。结论 ?VP8^*-sc-dimer亚单位疫苗可有效刺激机体产生针对RV Wa株的高水平抗体，且免疫应答显著优于?VP8^*。具有良好免疫原性的?VP8^*单链二聚体是开发新型人类RV疫苗的重要候选抗原，具有应用前景。

摘要:目的 猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3, PCV3)与母猪繁殖障碍、仔猪皮炎及心肌炎等疾病的发生密切相关。病毒在细胞上难以稳定传代，阻碍了PCV3动物感染模型的构建及其致病性的研究。方法 利用PCV3阳性断奶仔猪的淋巴结病料接种PK-15细胞进行病毒分离，通过PCR、间接免疫荧光试验和透射电镜观察等方法对毒株进行鉴定，成功分离到一株PCV3毒株(PCV3-HK株)，并测定了该毒株的全基因组。使用毒价为10^6.4 TCID₅₀/mL的第15代病毒细胞培养物在接种21日龄未断奶仔猪，通过临床症状、体重变化、排毒情况和病理变化等评价该毒株的致病性。结果 病毒分离鉴定结果表明，PCV3-HK株基因组全长2 000 bp，属于PCV3c基因亚型，病毒粒子为圆球形、无囊膜、直径约15-20 nm的颗粒，能够与PCV3 Cap蛋白单克隆抗体发生特异性反应；仔猪感染试验结果显示，PCV3-HK株感染猪出现皮炎、增重缓慢甚至消瘦等症状，以及淋巴结水肿、间质性肺炎等剖检变化；在感染的第7-21天，口拭子和肛拭子中均可检测到病毒核酸，并出现病毒血症。该病毒感染仔猪的心、肺、肾和淋巴结等器官，尤其在肾脏和淋巴结中观察到炎性细胞浸润、坏死细胞聚集等病理变化。结论 本研究分离到一株PCV3c毒株，建立了仔猪感染模型，为PCV3致病机制研究和疫苗研发提供了关键材料。

摘要:硫氧还蛋白家族在细菌氧化应激防御和毒力调控中具有重要作用，但其成员YbbN蛋白在副溶血弧菌中的功能尚不明确。目的 揭示YbbN蛋白对副溶血弧菌生物学特性和致病性的调控作用，为开发新型抗感染策略提供潜在靶点。方法 使用同源重组技术构建副溶血弧菌SH112株的ybbN基因缺失株(ΔybbN)和互补株(CΔybbN)，比较各菌株的生长特性、运动性、生物被膜形成能力、细菌间竞争、细胞黏附、细胞毒性以及对小鼠的致病性。结果 ybbN缺失不影响细菌生长、运动性、细胞黏附和定殖能力，削弱了副溶血弧菌的关键致病特性：生物被膜形成能力降低19%-30%，对大肠杆菌的杀伤效率极显著下降(*：P<0.05；****：P<0.000 1)，对HeLa细胞的毒性减弱27%，小鼠感染存活率提升87.5%。结论 本研究阐明YbbN通过调控副溶血弧菌的生物被膜形成、细菌竞争和宿主细胞毒性等关键环节，显著影响其生物学特性和致病性。这一发现不仅拓展了对硫氧还蛋白家族蛋白功能多样性的认知，更为防控副溶血弧菌感染提供了新的分子靶标和理论依据。

摘要:目的 挖掘并开发高活性、高稳定性且可异源重组表达的噬菌体源裂解酶，确定其最优作用条件。方法 采用浊度法验证重组表达裂解酶的溶菌活性及其最适作用条件。结果 对溶藻弧菌噬菌体phiV208全基因组进行注释和蛋白预测，结果显示ORF30编码的蛋白具备裂解酶功能，将其命名为lysV208。lysV208可在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性高效表达，经0.25 mmol/L IPTG诱导16 h后，纯化浓度达204 μg/mL。与0.5 mmol/L EDTA协同作用时，其溶菌活性(浊度降低率)可从24.2%大幅提高至68.0%。酶学特征研究表明，lysV208的最适作用温度为45 ℃ (溶菌活性75.6%)，在水生动物乃至陆生动物常见的细菌性疾病流行温度范围(25-37 ℃)内，也具有较高溶菌活性(52.8%-71.9%)。lysV208的最适作用pH为7.0，在弱碱性条件(pH 7.0-9.0)下可保持较高的溶菌活性(44.0%-63.2%)，显示出对海淡水养殖环境的适应性。此外，二价金属离子(Zn²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺)在0.1-1.0 mmol/L浓度范围内对lysV208的溶菌活性有一定促进作用，但高浓度(10.0 mmol/L)离子会极显著抑制酶活性(P<0.01)。裂解谱检测表明，重组酶lysV208不仅能高效裂解源噬菌体的宿主菌V208，还对非宿主菌株表现出广谱溶菌能力，对溶藻弧菌V039、创伤弧菌H1、副溶血弧菌GH32、哈维氏弧菌TY13和G1菌株的溶菌活性分别达到了59.7%、68.9%、65.8%、38.0%和65.6%。结论 重组裂解酶lysV208具有显著且稳定的体外溶菌活性，其裂解谱比源噬菌体phiV208更广。该酶在病原菌感染的生物防控领域，以及噬菌体-裂解酶协同制剂的开发中具有良好的应用前景。

摘要:目的 微生物在餐厨垃圾处理过程中扮演重要角色，深入解析其群落结构与功能特征有助于优化工艺流程、提升处理效率。 方法 采用16S rRNA基因扩增子高通量测序技术研究餐厨垃圾处理园区厌氧发酵系统、污水处理系统及空气净化系统(生物滤床和除臭塔)的微生物群落特征及潜在功能。 结果 各处理系统微生物群落多样性与组成显著不同：厌氧发酵系统多样性及丰富度较低，主要受温度、pH、生化需氧量(biochemical oxygen demand, BOD)等环境因子共同影响；功能分析表明，园区微生物以有机降解为主，厌氧发酵系统富集废水孢菌属( Defluviitoga)、甲烷热杆菌属( Methanothermobacter)和慢生微菌属( Lentimicrobium)，参与水解发酵与产甲烷过程；污水处理系统以 Candidatus_Anammoximicrobium、硝酸盐矛状菌属( Nitrolancea)和楚帕氏菌属( Truepera)为主，驱动有机物降解与氮素转化(如厌氧氨氧化、硝化-反硝化)；空气净化系统富集金黄杆菌属( Chryseobacterium)和副球菌属( Paracoccus)等，参与生物膜形成及挥发性有机物、硫化物降解代谢。 结论 各系统微生物群落特征与工艺条件密切相关，功能菌群富集指向其生态功能定位：厌氧发酵系统中产甲烷菌与协同降解菌共驱有机质转化与甲烷生成；污水处理系统氮循环相关菌群保障污染物高效去除；空气净化系统通过富集异养有机物降解菌及代谢复杂硫化物菌属[如鞘氨醇菌属( Sphingobium)、黄杆菌属( Flavobacterium)]提升除臭效率。本研究为餐厨垃圾处理中微生物功能调控与工程优化提供了理论支撑。

摘要:目的 利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase, POP)基因的猪肾PK15细胞系，并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)增殖的影响。方法 构建重组表达质粒，转染PK15细胞后通过Western blotting检测目的蛋白表达；采用有限稀释法筛选获得稳定表达POP的单克隆细胞系，并利用RT-qPCR和Western blotting检测POP基因和蛋白表达的稳定性；通过Cell Counting Kit-8试验评估筛选细胞系的细胞活力；综合运用Western blotting、RT-qPCR以及病毒滴度测定等方法，系统分析FMDV在稳定表达细胞系中的复制。结果 成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15单克隆细胞系；与对照细胞系相比，该细胞系的细胞活力无显著差异；单克隆细胞系传至P30代时，POP蛋白表达水平保持稳定；接种病毒实验结果显示，FMDV在稳定表达POP的PK15细胞系中的增殖水平显著高于对照组，并在不同代次细胞系中保持稳定。结论 本研究成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15细胞系，并证实该细胞系可显著促进FMDV的复制，为进一步解析POP蛋白促进FMDV复制的分子机制提供了实验材料。

摘要:脂肪酶是一类可在油水界面高效催化酯类化合物水解、醇解、酸解、酯交换及合成等反应的生物酶类，在医药、化工等多个领域发挥着重要作用。与动物、植物脂肪酶相比，微生物脂肪酶更易获取，具有更高的研究和开发利用价值。目的 从自然环境中筛选脂肪酶产生菌，优化其培养方案并研究其结构特征。方法 利用溴甲酚紫指示剂从油污土壤中分离产脂肪酶菌株，结合形态学观察和18S rRNA基因测序进行菌种鉴定；通过单因素实验及响应面试验优化菌株培养条件；对活性蛋白进行蛋白组测序，筛选潜在脂肪酶；对该脂肪酶基因进行PCR扩增和测序，并分析其多级结构。结果 从油污土壤中分离出一株产脂肪酶真菌FA3，经鉴定属于曲霉属(Aspergillus sp.)。以橄榄油为唯一碳源培养时，利用对硝基苯酚比色法测得菌株FA3胞内脂肪酶活力为263.75 U/g。优化后的培养条件为：乳化橄榄油4 mL/L，蛋白胨18 g/L，K₂HPO₄ 1 g/L，NaCl 10 g/L，MgSO₄ 0.5 mmol/L，pH 5.3，培养温度30 ℃，培养时间77.5 h。优化后酶活力达 2 120.27 U/g，提升了约8.04倍。经蛋白组分析和结构预测，该菌脂肪酶为GDSL脂肪酶，具有Gly-Asp-Ser保守序列，且存在严格保守的Ser、Gly、Asn、His残基，属于N-磺基葡萄糖胺磺基水解酶(N-sulphoglucosamine sulphohydrolase, SGNH)。结论 经过培养条件优化，菌株FA3产脂肪酶能力显著增强，具有良好的应用前景；明确了该脂肪酶的功能和结构特征，为相关蛋白的工程改造提供了依据。

摘要:目的 从菘蓝(Isatis indigotica Fort.)根中分离内生菌，研究内生菌对菘蓝生长生理及药用品质的影响，为其栽培生产中微生物调控提供参考。方法 选择相应的培养基分析内生菌的促生活性；随后进行盆栽试验，选取3株具促生作用的内生菌(Bacillus sp. BC00、Bacillus sp. BV11、Pseudomonas sp. PA28)单施菘蓝4次，最后一次处理后不同时间测定叶片的相关生理指标，并于采收期测定其根与叶的生长生理、活性成分等指标。结果 各处理组菘蓝叶的光合色素含量、营养代谢酶活性在每个时间点均高于对照组。3株内生菌对其生长和生物量积累均有显著促进作用，其中BC00对地上部分干重的促进效果最佳，与对照相比提升了74.16%；BV11对地下部分干重的促进效果最显著，与对照相比提升了216.02%。内生菌处理对其内源激素和可溶性物质含量有显著影响。3株内生菌对活性成分的影响各有不同，BC00与对照相比靛蓝和(R,S)-告依春含量分别增加了7.83%和5.64%；BV11的靛蓝和(R,S)-告依春含量略低于对照，但处理组各指标成分的总活性生物量均显著高于对照。结论 菘蓝内生细菌BC00、BV11和PA28对其生长生理及活性成分均有显著促进作用，其中BC00的综合促进效果最佳，为后期研发有利于菘蓝生长的微生物菌肥提供了依据。

摘要:目的 通过比较单核增生李斯特氏菌参考菌株EGD-e、lmo0175基因缺失株Δlmo0175和回补株CΔlmo0175在细菌生长、抗氧化应激、细胞和宿主感染等方面的差异，明确LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175在单核增生李斯特氏菌抗氧化应激和感染致病中的作用。方法 通过构建lmo0175的基因缺失株和回补株，探究Lmo0175对单核增生李斯特氏菌生长、抗氧化应激、细胞黏附、细胞侵袭、胞内增殖和组织定殖能力及小鼠致病力等方面的影响，从而明确Lmo0175在该菌抗氧化应激和感染宿主中的作用。结果 lmo0175基因缺失后，单核增生李斯特氏菌在抗氧化应激、胞内增殖和小鼠脏器定殖等方面的能力显著降低，但在生长能力、细胞黏附和侵袭能力方面无显著差异。结论 本研究阐明了LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175参与单核增生李斯特氏菌抗氧化应激、胞内增殖和组织定殖等过程，且有助于该菌对小鼠的致病力。

摘要:目的 探讨分枝横梗霉菌株LYSF001的致病性及其对常见抗真菌药物的耐药性，为动物真菌感染的诊断与治疗提供实验依据。方法 通过形态学特征和分子生物学技术分离并鉴定菌株；利用PCR技术检测菌株LYSF001的毒力基因，并构建动物感染模型以评估其致病性；采用组织病理学检查、GMS染色及ITS序列扩增技术分析感染动物的肝脏和肾脏病理变化；通过药敏试验评估菌株LYSF001对卡泊芬净、两性霉素B和伊曲康唑的敏感性。结果 菌株LYSF001鉴定为分枝横梗霉；检测出菌株LYSF001携带5个毒力基因，分别为CalA、PKP2、LaeA、Alp2和AspF1；该菌株感染小鼠后造成40%的死亡率，试验小鼠内脏充血，其中肝脏和肾脏的病理变化最为显著，表现为炎症细胞浸润和组织坏死；GMS染色显示心脏、肝脏中存在深色菌丝，ITS序列扩增进一步证实了真菌感染；药敏试验证实菌株LYSF001对两性霉素B及伊曲康唑表现出敏感性，然而该菌株对卡泊芬净存在耐药性。结论 本研究证实分枝横梗霉菌株LYSF001具有较强的致病性，可引发动物严重感染甚至死亡；同时，该菌株对两性霉素B和伊曲康唑敏感，但对卡泊芬净耐药。这为动物真菌感染的诊断与治疗提供了重要的实验依据和技术支持。

摘要:目的 探究生物被膜形成能力减弱的转座子插入突变株对副鸡禽杆菌生物学特性的调控作用。方法 以野生株JZIC-005和转座子突变株Tn-1504 (从突变库中筛选获得，生物被膜形成能力减弱)为研究对象，进行插入位点鉴定及生物学特性分析。结果 PCR验证显示转座子特异性插入副鸡禽杆菌TonB基因中。与野生株相比，突变株Tn-1504的增殖能力未发生显著改变(P>0.05)，但对DF-1细胞的黏附率降低46.57%，侵袭率下降77.61%，细胞毒性减弱34.97%。上述表型差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 本研究证实TonB基因失活可特异性削弱副鸡禽杆菌的宿主黏附、侵袭及毒性特征，为解析该病原致病机制及抗毒力策略开发提供了关键靶点。

摘要:目的 探究单核增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)通过毒力因子溶血素O (listeriolysin O, LLO)调控线粒体Ca²⁺摄取蛋白2 ( MICU2)表达及其互作关系，进而影响线粒体钙稳态和细菌胞内增殖的分子机制。方法 采用Western blotting技术检测单核增生李斯特氏菌EGD-e和Δhly感染HeLa细胞后MICU2的表达变化。运用基因沉默技术和真核过表达技术探究MICU2蛋白水平变化对单核增生李斯特氏菌胞内增殖能力的影响。利用AlphaFold3预测LLO与MICU2的互作位点，并通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)验证二者的相互作用。结合线粒体钙荧光探针(Rhod-2 AM)分析MICU2对钙稳态的调控作用。结果 EGD-e感染4 h和6 h后MICU2表达显著上调(P<0.001)，而Δhly感染后MICU2的表达量无显著变化(P>0.05)。沉默MICU2可增强细菌增殖能力(P<0.01)并升高线粒体钙水平(P<0.05)；过表达MICU2则减弱细菌增殖能力(P<0.01)并降低线粒体钙水平(P<0.05)。AlphaFold3预测显示，LLO第462位丙氨酸(Ala)与MICU2第119位谷氨酸(Glu)通过氢键结合，Co-IP证实二者存在相互作用。结论 本研究表明，单核增生李斯特氏菌通过LLO上调MICU2表达，MICU2通过减少线粒体钙抑制细菌胞内增殖，LLO与MICU2的互作是此过程的关键分子基础。本研究为深入探究单核增生李斯特氏菌的致病机理提供了参考。

摘要:目的 构建伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, Cp)宣汉株(XH02) LPXTG基序蛋白编码基因敲除菌株(XH02Δlpxtg270)，探究lpxtg270在XH02生长、生物被膜形成及感染致病过程中的作用。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建XH02Δlpxtg270，比较该敲除菌株与野生菌株XH02在生物学特性、对J774A.1巨噬细胞的侵袭能力、体内感染小鼠致病力等方面的差异。结果 与XH02相比，XH02Δlpxtg270的菌落形态、生长曲线、黏附J774A.1巨噬细胞的能力及胞内增殖能力均无明显变化，但XH02Δlpxtg270的生物被膜形成能力、对J774A.1的侵袭能力、感染引发J774A.1释放乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)及分泌IL-1β的能力显著降低，XH02Δlpxtg270体内感染小鼠的致病力及在肝脏、脾脏、肾脏、肺脏和脑中的载菌水平显著下降，引起小鼠上述脏器的病理变化较轻。结论 本研究证实LPXTG270与Cp形成生物被膜、感染侵袭巨噬细胞的能力相关，在Cp感染小鼠致病过程中发挥重要作用。

摘要:以果聚糖蔗糖酶(sucrose-6-fructosyltransferase, SacB)为基础的双交换同源重组技术虽常用于革兰氏阴性菌基因组编辑，但其负筛选效率在不同菌株间常存在显著差异，部分菌株因代谢特性或基因组组成差异导致效率低下。 目的 构建基于VI型分泌系统(T6SS)效应蛋白Txe1的新型负筛选体系，以提升无痕基因组编辑效率。 方法 改造传统自杀质粒pDM4，引入卡那霉素抗性基因，获得衍生质粒pDM4K；再以阿拉伯糖诱导型Txe1毒素C端结构域表达盒( araC-P _BAD:: txe1 ^CTD )替换质粒中的 sacB基因，构建新型负筛选质粒pTL1010。以杀鱼爱德华氏菌FC2株毒力相关基因 tssB为靶点，系统比较Txe1与SacB系统的负筛选效率。 结果 阿拉伯糖诱导下，Txe1系统的负筛选效率达91.1% (假阳性率8.9%)，显著优于传统SacB系统(假阳性率100%， P<0.01)。 结论 新型Txe1负筛选质粒pTL1010显著提高了杀鱼爱德华氏菌的无痕基因编辑效率，为革兰氏阴性菌精准遗传操作提供了高效新工具。

摘要:目的 探究植物多样性和土壤改良对铅锌矿废弃地土壤微生物群落的影响。方法 以9种矿区生态恢复常用植物为研究对象，设置不同植物多样性水平(S1-S5)，每种植物多样性水平下均设置对照组(Y：不添加改良剂)和改良组(G：添加有机肥和聚丙烯酰胺)开展盆栽试验，研究植物多样性和土壤改良对土壤微生物群落的影响。结果 改良组植物株高普遍高于对照组；土壤改良后碱解氮、速效磷和速效钾含量均明显升高；而重金属Cd、Pb含量在物种丰富度为9 (S5)时降幅最大，分别下降37.20%和14.85%。土壤微生物多样性随植物多样性的增加而提高；改良剂对真菌群落的丰富度及多样性具有抑制作用，对细菌群落的丰富度与多样性具有促进作用。改良组中土壤真菌群落的丰度在GS4配置时达到最高，其中Observed指数和Chao1指数分别为110.50、169.23；细菌群落丰度在GS2时达到最高，其中Observed指数和Chao1指数分别为1 081.59、1 116.79。在真菌群落中，子囊菌在门和属2个分类学水平上改良组较对照组丰度均有不同程度升高，且子囊菌门的丰度随植物多样性的增加而提高；土壤改良后降低了毛霉菌门和根霉属的丰度，但增加了粪壳菌在属分类学水平上的丰度，且随着植物多样性升高，毛霉菌和根霉菌的丰度会降低。在细菌群落中，土壤改良后增加了鞘氨醇单胞菌和出芽单胞菌在属水平上的丰度。结论 土壤微生物多样性随植物多样性的增加而提高，土壤改良剂的施加抑制土壤真菌群落丰富度和多样性，促进细菌群落丰富度与多样性；随着植物多样性水平的提高，子囊菌门的丰度提高，毛霉菌门和根霉属的丰度降低。

摘要:目的 探讨氟暴露对模式昆虫家蚕肠道微生态系统的影响，深入解析氟在不同条件下对昆虫宿主的毒害机制。方法 通过测定氟暴露后家蚕肠道组织中多种生理相关酶活性的变化，结合苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肠道组织的病理学变化。同时，采用16S rRNA基因扩增子测序技术分析肠道菌群的动态变化，并利用实时定量聚合酶链式反应技术检测肠道组织中免疫相关基因的表达变化。结果 氟暴露显著增加了家蚕肠道组织中丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量，降低了还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)水平，并削弱了过氧化氢酶(catalase, CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)、羧酸酯酶(carboxylesterase, CarE)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP/ALP)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)等的活性；此外，肠道上皮细胞碎裂，细胞与基底膜分离。Toll免疫调节途径受到抑制，导致抗菌肽蛋白基因(如attacin、cecropin、lebocin和lysozyme)的表达显著下降。肠道菌群分析显示，谷氨酸杆菌(Glutamicibacter)、葡萄球菌(Staphylococcus)、不动杆菌(Acinetobacter)和甲基杆菌(Methylobacterium)的相对丰度显著减少，且菌群结构发生显著异质性变化。菌群功能预测显示，其代谢途径(metabolic pathways)和次级代谢物生物合成(biosynthesis of secondary metabolites)功能明显增强。结论 氟暴露显著削弱昆虫宿主的抗氧化能力、基础代谢和免疫功能，损害肠道组织的结构完整性，并导致肠道菌群失衡。这种对肠道微生态系统稳态的破坏可能是引发昆虫物种多样性降低和生物量减少的重要原因。

摘要:目的 构建表达增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)报告基因的重组甲型流感病毒，并研究其体外生物学特性、抗病毒药物筛选及中和抗体检测的应用。方法 运用流感病毒反向遗传学技术在H1N1-PR8病毒神经氨酸酶(NA)基因的C端插入EGFP基因，成功构建并拯救出重组甲型流感病毒，命名为PR8NAEGFP/WSN。采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)与测序分析验证EGFP插入位置的准确性及遗传稳定性；通过EGFP报告基因表达、复制动力学分析和空斑形态观察，对重组病毒(PR8NAEGFP/WSN)和对照病毒(PR8NA/WSN，无EGFP插入)进行鉴定；采用病灶形成试验(focus-forming assay, FFA)、定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)和EGFP荧光检测，评估流感病毒阳性药物法匹拉韦的体外抗病毒药效；同时采用病灶减少中和试验(focus reduction neutralization test, FRNT)和报告基因活性检测，开展甲型流感病毒(influenza A virus, IAV)中和抗体检测。结果 重组病毒(PR8NAEGFP/WSN)在鸡胚中经过5代盲传后仍能保持遗传稳定。与PR8NA/WSN相比，该重组病毒在48 h测得的病毒滴度略低，结晶紫噬斑形态与对照病毒相似。采用重组病毒测得的法匹拉韦半数有效浓度(half maximal effective concentration, EC₅₀)与对照病毒一致，且通过FFA、qPCR和EGFP荧光等多种检测方法所得的EC??值之间具有良好的相关性。FRNT和EGFP荧光测定的中和抗体滴度相关系数r为0.930 4，结果具有良好的一致性。结论 携带报告基因的重组流感病毒为IAV的基础研究、抗病毒药物和疫苗评价提供了实时可视化的工具。

摘要:目的 添加9种不同氨基酸培养坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas campaniensis) XH26，分析菌株的生长情况与胞内四氢嘧啶(ectoine)的积聚量差异，明确最适氨基酸前体对菌株XH26四氢嘧啶的合成代谢通路的影响。方法 在最适盐浓度(1.5 mol/L)条件下，以9种氨基酸(l-谷氨酸钠、l-谷氨酰胺、l-天冬氨酸、l-天冬酰胺、l-组氨酸、l-色氨酸、l-甘氨酸、l-丝氨酸和l-赖氨酸)作为培养基的单一碳/氮源，设置氨基酸浓度梯度范围为20-50 mmol/L (间隔5 mmol/L)，筛选四氢嘧啶积聚量最高的最适氨基酸及其作用浓度。设置l-天冬氨酸低浓度组[low group (L), 20 mmol/L]、中浓度组[medium group (M), 35 mmol/L]和高浓度组[high group (H), 50 mmol/L]进行靶向代谢组学测序与分析。结果 四氢嘧啶合成量随氨基酸浓度梯度先增加后降低，并在最适(30 mmol/L或35 mmol/L)浓度时达到最高。代谢组学分析显示，分别筛选出28个(L vs. M)、27个(L vs. H)和26个(H vs. M)显著差异代谢物，如甘油酸、乳糖、腺苷5′-单磷酸、α-酮戊二酸、葡萄糖-1-磷酸、延胡索酸、柠檬酸等。KEGG代谢通路富集分析发现l-丙氨酸、l-天冬氨酸和l-谷氨酸代谢通路是最显著的富集通路。结论 靶向代谢组学技术分析细菌胞内差异代谢物发现，菌株XH26通过天冬氨酸-丙氨酸轴和精氨酸-脯氨酸代谢轴实现氮稳态与能量供应的再平衡。

摘要:目的 开展新疆2株驴源马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, SEZ)不同区域流行株(YLCD588和HT222)的致病特征、耐药特点、多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)及其基因组比较分析，明确该菌的分子进化规律，分析该菌致病性和耐药性相关的基因和表型特征，探究SEZ的致病与耐药机制，为该菌的防控提供科学依据。方法 利用二代测序技术对分离菌株进行全基因组测序，将测序数据与数据库中已有序列构建MLST发育树；利用毒力因子数据库(https://www.mgc.ac.cn/VFs/)和基因组流行病学中心数据库(http://genomicepidemiology.org)对其毒力基因和耐药基因分别进行注释和比较；对2株菌的生长、药物敏感性和生物膜形成进行检测与比较。将菌株分别接种小鼠，观察比较实验动物的发病情况，并对发病小鼠的肺脏和脾脏组织进行病理组织学观察和组织菌体载量的检测比较。结果 测序结果显示，HT222与YLCD588基因组大小分别为2 105 005 bp和2 090 225 bp，分别有1 995个和1 905个编码区，HT222共有214个毒力基因，YLCD588共有212个毒力基因；HT222携带有235个耐药基因，YLCD588共有233个耐药基因。YLCD588为一个新的ST型ST545，MLST系统发育树显示YLCD588与山羊源SEZ具有最近的亲缘关系，而HT222则与犬源SEZ最近。YLCD588对6种抗生素耐药，HT222对4种抗生素耐药。结晶紫法(P<0.05)和共聚焦显微观察均表明YLCD588生物膜形成能力显著高于HT222，而HT222菌株对小鼠致死率(P<0.05)及组织荷菌量(P<0.01)显著高于YLCD588，且对小鼠病理损伤更严重。结论 2株流行株具有不同的基因组特征、序列分型(sequence type, ST)、致病和耐药特征，HT222比YLCD588携带毒力和耐药基因多，致病表型更强；YLCD588比HT222生物膜形成能力强，耐药表型显著；拓宽了对不同驴源SEZ分子流行、致病与耐药机制的认识，为有效控制SEZ的感染传播以及临床治疗提供了参考。

摘要:目的 分析无钙离子(Ca²⁺)环境对副溶血弧菌生物膜形成、毒力及基因表达的影响。方法 向培养基中添加乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(ethylene glycol-tetraacetic acid, EGTA)以螯合Ca²⁺，从而构建无Ca²⁺环境。采用结晶紫染色实验、泳动及群集运动实验检测副溶血弧菌的生物膜形成能力和运动能力；通过神奈川现象检测、HeLa细胞黏附及细胞毒性实验分析副溶血弧菌的毒力表型；利用RNA-seq技术分析无Ca²⁺环境对副溶血弧菌基因表达的影响。结果 无Ca²⁺环境可抑制副溶血弧菌的生长，显著降低其生物膜形成能力、胞内c-di-GMP水平、泳动及群集运动能力。同时，该环境还能抑制副溶血弧菌的溶血活性及细胞黏附活性，但增强其细胞毒性。转录组分析显示，无Ca²⁺环境下有359个基因呈现显著差异表达(differentially expressed genes, DEGs)，这些基因涉及生物膜形成、运动、毒力及调控子相关基因；其中，参与侧鞭毛和极鞭毛合成的基因表达下调，多数与毒力相关的基因表达上调，推定的调控子基因表达下调。结论 无Ca²⁺环境对副溶血弧菌的生物膜形成、运动能力、毒力以及基因表达均具有显著影响。

摘要:目的 阐释乳杆菌在小曲清香型白酒酿造中的演替规律，以及优势乳杆菌在发酵过程中对酒体乙乳比的影响。方法 采用高通量测序技术解析小曲及酒醅中乳杆菌种水平的演替规律；结合改良培养基与富集培养方法从酒醅中分离乳杆菌；对优势乳杆菌进行耐受性评价、单一碳源发酵实验、高粱水解液发酵实验以及实验室模拟固态强化乳杆菌发酵实验，探究不同乳杆菌的生理生化特征、对单一碳源的发酵特征，以及对酒体中乙乳比的影响。结果 从酒醅中共筛选出15种乳杆菌，并通过高通量数据分析确定了8种优势乳杆菌(欧研会黏液乳杆菌、瑞士乳杆菌、布氏慢生乳杆菌、希氏慢生乳杆菌、短发酵剂乳杆菌、发酵黏液乳杆菌、植物乳植杆菌与耐醋乳杆菌)。进一步耐受性分析与单一碳源发酵特征研究表明8种优势乳杆菌均能耐受实际发酵环境(乙醇/乙酸/乳酸)，其中植物乳植杆菌存在麦芽糖利用缺陷，耐醋乳杆菌存在d-半乳糖利用缺陷；瑞士乳杆菌与欧研会黏液乳杆菌在单一碳源中发酵呈现单产物特征；短发酵剂乳杆菌、布氏慢生乳杆菌与希氏慢生乳杆菌在单一碳源与高粱水解液中发酵呈现多产物发酵特征。实验室模拟固态强化乳杆菌发酵实验结果显示，与对照组相比强化希氏乳杆菌可使酒体中乳酸乙酯及乙酸乙酯含量分别提升175%和44%，乙乳比降至0.357；强化布氏慢生乳杆菌可使酒体中乙酸乙酯含量提升50%，乳酸乙酯含量降低71%，乙乳比升至4.496。结论 小曲清香型白酒酒醅中的优势乳杆菌总体耐受性较强，优势乳杆菌对单一碳源的发酵存在差异，强化不同优势乳杆菌发酵对酯类的调控效果不同。本研究结果为实现小曲清香型白酒发酵过程中关键风味物质的动态调控提供了重要理论依据。

摘要:目的 探究变更施肥对水稻土微生物群落的影响。方法 在长期定位试验田中设置3组变更施肥模式处理：化肥与化肥改常量有机肥；常量有机肥与常量有机肥改化肥；高量有机肥与高量有机肥改化肥。通过宏基因组测序结合生物信息学分析研究施肥模式变更对土壤微生物群落结构、多样性及互作网络的影响。结果 与化肥处理相比，化肥改常量有机肥处理显著提高了土壤有机碳、溶解性有机碳、全氮和碱解氮的含量(P<0.05)。常量有机肥改化肥处理和高量有机肥改化肥处理的土壤碳、氮水平分别低于常量有机肥处理和高量有机肥处理。化肥改常量有机肥处理显著改变了酸杆菌、硝化螺菌、Candidatus Rokubacteria、毛霉菌和奇古菌的丰度；常量有机肥改化肥处理未显著改变水稻土微生物群落的相对丰度(门水平)；高量有机肥改化肥处理显著改变了硝化螺菌的相对丰度和古菌群落的组成。改变施肥模式对土壤微生物α多样性无显著影响(P>0.05)，但不同施肥处理之间微生物群落的β多样性存在显著差异(P<0.05)。网络分析显示，与化肥处理相比，化肥改常量有机肥处理的节点数(181)、边数(2 935)、平均度(16.215)、模块化(0.757)及平均聚类系数(0.495)均更高；常量有机肥改化肥处理的边数(3 894)和平均度(21.514)高于常量有机肥处理，而模块化(0.599)低于常量有机肥处理(0.751)；高量有机肥改化肥处理的网络拓扑参数均低于高量有机肥处理。冗余分析表明，溶解性有机碳(22.1%)、土壤pH (16.8%)、全氮(15.6%)、铵态氮(14.6%)、速效钾(11.8%)和有效磷(10.6%)是驱动微生物群落变化的主要因子。结论 变更施肥模式通过改变土壤理化因子影响了水稻土微生物群落结构和网络特征。无机肥变更为有机肥可优化微生物群落结构，增强土壤生态功能；而有机肥变更为无机肥施入可能降低土壤碳、氮供应水平，对土壤微生物群落的稳定性和复杂性产生负面影响。

摘要:耳念珠菌(Candida auris)作为一种多重耐药真菌，其生物膜形成是导致临床感染难治性的关键因素，目前针对其生物膜的有效干预手段仍较为匮乏。目的 探讨中药单体苦参碱(matrine, MT)对C. auris的抗菌活性及生物膜抑制机制。方法 采用微量稀释法测定MT对C. auris的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)、最小杀菌浓度(minimum fungicidal concentration, MFC)和最小生物膜抑制浓度(sessile minimum inhibitory concentration, SMIC)；运用平板法观察MT干预下C. auris的时间生长曲线和菌落形态；利用水解酶法测定MT对C. auris生物膜水解酶活性的变化；通过水-烃两相法观察MT对C. auris生物膜细胞表面疏水性的变化；采用XTT法、结晶紫法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察MT对C. auris生物膜代谢活力及结构的影响；使用DAPI染色法检测MT对生物膜状态下C. auris细胞核的变化；借助大蜡螟感染模型观察机体在C. auris感染时MT的潜在保护作用。结果 MT对C. auris的MIC为128 μg/mL，MFC和SMIC均为512 μg/mL；其作用机制主要是通过降低C. auris细胞表面疏水性抑制生物膜成熟结构的形成，同时显著降低C. auris的代谢活力并诱导细胞核形态异常，最终抑制C. auris增殖；大蜡螟实验进一步证实MT可减轻C. auris的侵袭损伤。结论 MT对C. auris具有显著的抗菌作用，并能有效抑制其生物膜的形成，为临床应对多重耐药C. auris感染提供了新型候选药物及潜在作用靶点。