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摘要:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为常见的医院获得性感染病原菌，长期严重威胁公共卫生安全，造成了巨大的社会经济负担。精氨酸作为条件必需氨基酸，在S. aureus感染致病与宿主免疫应答中发挥着双重调控作用：一方面，精氨酸的合成与分解参与S. aureus生物被膜形成和耐药性建立；另一方面，精氨酸代谢通过影响巨噬细胞极化、免疫调节、代谢重编程以及信号转导等途径，在宿主抗感染免疫、组织修复和伤口愈合中发挥重要作用。鉴于精氨酸的合成与分解是S. aureus-巨噬细胞互作的关键调控枢纽，其代谢平衡影响感染与抗感染的进程和转归。因此，通过靶向调控精氨酸代谢来控制S. aureus感染是具有重要转化医学价值的新策略。本文以精氨酸代谢为核心，分别阐述S. aureus和巨噬细胞如何通过竞争与利用精氨酸来发挥各自的生物学功能，并深入剖析精氨酸水平变化在S. aureus-巨噬细胞互作中的关键作用，探讨调节精氨酸代谢这一潜在抗菌策略可进一步开展的研究方向与可能面临的挑战。

摘要:肝癌作为全球高发且预后不良的恶性肿瘤，其病理进程与肠道菌群(gut microbiota, GM)密切相关。近年来，在肝炎-肝纤维化-肝硬化-肝癌这一病理进展过程中GM参与肝癌发生发展的相关研究日益受到关注。GM失衡可通过多种途径影响肝癌进程，具体包括通过GM及其代谢产物调控肝脏免疫微环境、介导表观遗传修饰及外泌体信号、与肝癌危险因素协同作用等。肝癌患者普遍存在GM多样性降低且致病菌群增多的特征，这为靶向GM的治疗方法提供了理论依据，具体涵盖益生菌干预、合理使用抗生素、粪菌移植、GM与传统治疗手段联合应用以及整合性治疗方案等。本文主要综述近年来GM失衡在肝癌中的发病机制及靶向GM干预的相关研究进展，为今后肝癌发病机制的研究及治疗提供参考。

摘要:热休克蛋白8 (heat shock protein family A member 8, HSPA8)是一种广泛存在于细胞内的分子伴侣蛋白。该蛋白参与多项细胞生理过程，主要包括蛋白质的正确折叠与转运、应激反应、抗原蛋白呈递、自噬介导以及免疫调控等，对维持细胞内环境稳态至关重要。此外，HSPA8在病毒感染的多个过程中发挥关键作用。本文综述了HSPA8在病毒黏附、病毒糖蛋白-受体复合物形成、内化、脱壳、基因组复制、组装，以及调节宿主代谢和免疫反应等过程中所发挥的重要作用及其分子机制，为后续靶向HSPA8的抗病毒药物研发奠定了基础。

摘要:冠状病毒是严重威胁人类与动物健康的病原体。主蛋白酶(main protease, Mpro)在病毒生命周期及宿主免疫调节中均发挥着重要作用，是开发广谱抗冠状病毒药物的关键靶点。Mpro的核心作用在于特异性切割病毒多聚蛋白pp1a和pp1ab，以释放功能性非结构蛋白(non-structural proteins, NSPs)，进而驱动病毒复制/转录复合体的组装。此外，Mpro能够靶向切割宿主免疫信号通路中的关键分子，有利于病毒实现免疫逃逸。鉴于其功能的双重性以及催化中心的高度保守性，针对Mpro的研究已成为该领域的热点。本文系统概述了Mpro的结构特征与功能多样性，重点论述了其在病毒复制周期中的催化机制及介导免疫抑制的作用，进而详细探讨了Mpro抑制剂的筛选方法与设计策略，为针对该靶点的抗冠状病毒药物研发提供了理论依据和新思路。

摘要:胃肠道微生物在宿主营养代谢、免疫调节和肠道屏障功能等方面发挥关键作用，因此解析胃肠道微生物的来源、定殖规律及动态演变过程，对宿主健康调控具有重要意义。本文全面回顾了胃肠道微生物群落组成的多样性和功能的多样性，重点探讨其起源与传递途径，特别强调垂直传播中母婴传递和父系遗传对群落结构及功能的影响。此外，梳理了生命各阶段的定殖规律，并总结归纳了分娩方式、哺乳、抗生素暴露等关键因子在群落组装过程中的影响。最后，整合了微生物组测序技术和常见的微生物溯源技术，为未来精准调控微生物、实现以健康为导向的胃肠道微生态重建提供科学依据和新的思路。

摘要:放线菌是一类在生态功能和生物技术领域均具有重要地位的革兰氏阳性细菌，它们不仅驱动自然界的有机质循环，还是抗生素及其他生物活性天然产物的主要来源。其复杂的生理适应与生命活动受到精密信号转导系统的调控。本文聚焦于2类代表性放线菌：形态复杂且次级代谢丰富的链霉菌(代表工业生产菌株)以及具备宿主适应性与致病性的分枝杆菌(代表病原类群)，系统综述了核苷类第二信使[包括环二腺嘌呤核苷酸(cyclic diadenosine monophosphate, c-di-AMP)、环二鸟嘌呤核苷酸(cyclic di-guanosine monophosphate, c-di-GMP)、环腺嘌呤核苷酸(adenosine monophosphate, cAMP)及(p)ppGpp]在细胞内的代谢、信号传递及其调控网络。进一步探讨了这些信号分子如何与双组分系统、群体感应及蛋白质酰化修饰等其他调控途径交互作用，从而整合环境与发育信号，协调细菌的生长、发育、次级代谢合成及环境适应性，为理解放线菌信号转导系统的整体性、动态性及其在基础生命科学研究和生物技术、医学等领域的潜在应用提供参考。

摘要:羊地方性鼻内肿瘤是由羊地方性鼻内肿瘤病毒感染引起的一种进行性、接触性传染病，主要表现为羊鼻内筛骨和鼻甲骨上皮黏膜组织出现肿瘤生长。在疾病后期，肿瘤体积显著增大可导致上呼吸道堵塞，进而使发病动物窒息死亡。该病会使感染动物的生产性能大幅下降，给畜牧业带来经济损失，且对珍贵的地方品种和核心种羊群构成威胁，造成优质种羊的损失，成为危害养羊业的重要疫病之一。目前尚无针对该病的疫苗和特效治疗方法。本文就羊地方性鼻内肿瘤病毒的病原学、流行病学、临床症状、主要病理变化、诊断及防治等方面进行综述，为该病的预防和控制提供借鉴与思路。

摘要:尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)是引发尿路感染(urinary tract infection, UTI)最常见的病原菌，能够定殖于尿路上皮细胞，可引发严重的败血症、肾衰竭，对人类健康构成威胁。乳酸化是巨噬细胞抗UPEC感染的一种重要蛋白质翻译后修饰方式。UPEC CFT073菌株的DNA序列中包含具有催化乳酸生成功能的乳酸脱氢酶ldhA基因，但其调控巨噬细胞乳酸化的具体机制尚未明确。目的 探讨ldhA基因产物LdhA调控巨噬细胞乳酸化进而影响UPEC致病性的作用机制。方法 利用生物信息学在线工具预测ldhA基因产物LdhA的功能结构域和跨膜区；通过分子克隆技术体外表达重组蛋白rLdhA；使用乳酸脱氢酶活性检测试剂盒测定rLdhA的乳酸脱氢酶活性；采用Western blotting检测rLdhA进入巨噬细胞的方式及其对巨噬细胞乳酸化的影响；运用ELISA检测rLdhA对巨噬细胞炎症因子的影响；利用全自动微生物分析系统检测LdhA对UPEC CFT073耐药性的影响；分别用产生LdhA的野生型UPEC CFT073菌株(CFT073^wt)、敲除ldhA基因的CFT073菌株(CFT073^ΔldhA)，或经rLdhA及乳酸脱氢酶抑制剂预处理的rLdhA感染或尾静脉注射小鼠，观察并测定LdhA对小鼠致病性的影响。结果 LdhA蛋白含有乳酸脱氢酶功能域且能够外分泌。成功构建了ldhA基因体外表达系统，表达并提纯了重组蛋白rLdhA。rLdhA具有乳酸脱氢酶功能，能通过网格蛋白介导的内吞作用进入巨噬细胞，并剂量依赖性地促进巨噬细胞乳酸化水平。rLdhA显著抑制脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子生成。LdhA能够显著影响UPEC CFT073的耐药性，并促进UPEC对小鼠的致病性。结论 LdhA通过促进巨噬细胞的乳酸化水平抑制炎症因子的产生，进而增强UPEC的致病性，其具体的分子调控机制尚需进一步研究。本研究为进一步阐明UPEC的致病性提供了新的科学依据。

摘要:目的 从健康大口黑鲈( Micropterus salmoides)肠道中筛选对鰤鱼诺卡氏菌( Nocardia seriolae)具有拮抗作用的潜在益生菌。 方法 采集大口黑鲈肠道样本，经梯度稀释后涂布于TSA平板以分离和纯化菌株。采用打孔法筛选对鰤鱼诺卡氏菌具有拮抗效果的菌株作为后续实验菌。通过形态学特征、生理生化特性、16S rRNA基因序列同源性比对及系统发育树分析鉴定菌株种属，并对实验菌的生长特性、黏附能力、无细胞发酵上清液抑菌活性及生物安全性进行测定和分析。 结果 从40株分离菌中筛选出2株对鰤鱼诺卡氏菌具有稳定且显著拮抗作用的菌株XXLC06和XXLC08，分别鉴定为拟长杆状赖氨酸芽孢杆菌( Lysinibacillus macroides)与纺锤状赖氨酸芽孢杆菌( Lysinibacillus fusiformis)。2株菌在温度25-37 ℃、盐度5‰-30‰、pH 5.5-9.0条件下生长良好，在0.3%和0.5%胆盐浓度下的存活率均高于53%。自聚集实验显示，8 h后XXLC06与XXLC08的自聚集率分别为68.09%和63.16%。在3种有机溶剂中，XXLC06与XXLC08的疏水率均高于50%。2菌株与鰤鱼诺卡氏菌静置共聚8 h后，共聚集率分别达54.62%和52.44%。XXLC06和XXLC08的无细胞发酵上清液对鰤鱼诺卡氏菌的抑菌圈直径分别为(28.15±0.44) mm和(22.63±0.52) mm。2菌株均未表现出溶血活性，对23种受试抗菌药物敏感；急性攻毒试验证实其对大口黑鲈无致病性。 结论 菌株XXLC06和XXLC08具有良好的生长适应性、黏附能力、生物安全性及稳定的体外拮抗活性，为防控鰤鱼诺卡氏菌提供了潜在的益生菌资源与实验依据。

摘要:目的 明确灰葡萄孢TetR家族转录因子BcPDR1的关键氨基酸位点，为阐明BcPDR1调控病菌生长发育及致病力的机制奠定基础。方法 运用生物信息学手段分析BcPDR1蛋白的关键氨基酸位点，选取4个保守区域(32-34、76-95、140-150和189位氨基酸)进行定点突变。在敲除突变体ΔBcpdr1的基础上，构建BcPDR1-M1 (Δ32-34)、BcPDR1-M2 (Δ76-95)、BcPDR1-M3 (Δ140-150)和BcPDR1-M4 (将189位Ile突变为Lys)突变体。对上述4个突变体与灰葡萄孢野生型菌株、ΔBcpdr1以及互补菌株CE进行表型和致病力的对比分析。结果 突变体BcPDR1-M1、BcPDR1-M2、BcPDR1-M3和BcPDR1-M4的菌落形态、菌丝形态和生长速率与ΔBcpdr1相似，而与野生型BC22和互补菌株CE存在显著差异；各突变体均能在番茄果实和烟叶上形成病斑，但病斑面积显著小于野生型BC22和互补菌株CE。结论 灰葡萄孢TetR家族转录因子BcPDR1的32-34、76-95、140-150位区域及189位氨基酸为其发挥功能的关键调控位点。

摘要:目的 探究不同果肉厚度辣椒4个生态位的内生微生物群落差异及关联，挖掘不同辣椒果肉厚度对应的微生物群落差异。方法 以不同果肉厚度的辣椒为试验材料，分别提取辣椒根、茎、叶、果部位的DNA，利用Illumina平台对不同果肉厚度辣椒的4个生态位内生微生物群落进行细菌16S rRNA基因和真菌ITS区测序，鉴定并筛选与辣椒果实厚度具有潜在关联的菌群，同时开展盆栽试验进行验证。结果 不同果肉厚度辣椒的4个生态位的内生细菌和真菌群落均存在差异，其中果部细菌群落结构差异最为显著。果实属水平柱状图和物种差异分析表明，鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)在厚肉型辣椒中显著富集，且与果肉厚度呈正相关。从辣椒果实中分离出28种内生菌，其中有2株菌属于鞘氨醇单胞菌属，分别为水生鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas aquatilis)和菽内氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas yabuuchiae)，这2株菌均具备产吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)和固氮能力。通过辣椒盆栽试验发现，这2株内生菌可显著促进辣椒果实生长，施加菌剂的辣椒果肉厚度增加75.44%。结论 辣椒果实中鞘氨醇单胞菌属的相对丰度与辣椒果肉厚度呈显著正相关，且该菌属能促进辣椒果实生长。本研究对揭示内生微生物群落在调控辣椒果实发育响应中的作用具有重要意义，可为辣椒果实品质改良提供必要的理论依据。

摘要:目的 塞内卡病毒A (Senecavirus A, SVA)仍对我国养猪业构成严重危害，进一步了解最新流行毒株的基本生物学特性和遗传演化特征。方法 于2024年11月从华东地区某猪场采集疑似口蹄疫患病猪的水疱皮组织，经逆转录PCR (reverse transcription-PCR, RT-PCR)检测，将阳性样品按病毒分离的常规方法接种BHK-21细胞；利用间接免疫荧光试验初步验证病毒分离情况，并对其全基因组进行扩增测序和遗传演化分析，与重要流行节点的参考毒株VP1蛋白序列比对分析氨基酸变异特点；通过蚀斑形成试验和一步生长曲线评估分离毒株的增殖特性，再利用透射电镜观察病毒粒子形态。结果 经RT-PCR检测和病毒分离试验证实，该发病猪的病原为SVA，将分离获得的毒株命名为SDWF/11/2024株。其基因组全长为7 292 bp，整体结构与已报道的SVA株高度一致；系统发育树分析表明，SDWF/11/2024株归属于USA-like进化分支，与中国2015-2018年分离株存在一定分化，与智利2022年分离株亲缘关系最近；在体外复制特性方面，该毒株可在BHK-21细胞上稳定增殖，呈现出典型的细胞病变效应，其复制动力学特征与早期分离毒株HN/11/2017相似，但形成的蚀斑形态存在差异；通过透射电子显微镜观察，可见直径约为25-35 nm的颗粒，其大小特征与SVA病毒粒子相符。结论 本研究成功分离并表征了2024年我国猪群中流行的SVA毒株SDWF/11/2024，揭示了其分子演化特征。SDWF/11/2024株的分离为我国监测SVA流行提供了新的参考样本，提示该病毒仍可能以低水平存在于猪群中。这对认识SVA遗传多样性与流行趋势、完善其分子流行病学监测体系及制定科学防控策略具有重要意义。

摘要:多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica, Mh)是导致牛呼吸道疾病的主要细菌性病原。目前，对这2种病原在运输后犊牛群中存在的多样性情况仍缺乏了解，严重影响了其感染的有效防控。目的 调查一批从内蒙古某犊牛交易市场购买并运送到重庆合川某养殖场的育肥犊牛群中存在的Pm和Mh多样性情况。方法 犊牛运送到牛场后分4个时间点采集有呼吸道症状的犊牛鼻拭子进行细菌分离培养。根据菌落特点、溶血特性及瑞氏染色特性挑取Pm和Mh疑似菌落，通过特异PCR鉴定及16S rRNA基因序列分析进行确定，进而测定各分离株的血清型、生化及耐药特性，以及毒力基因和耐药基因的存在情况。结果 在4个时间点所采集的68个有呼吸道症状的鼻拭子中共分离到23株A型Pm、10株A6型Mh和1株A2型Mh，总分离率达50%。仅在1个样本中同时分离到了Pm和Mh，部分菌株的生化特性及耐药特性呈现多样性，且与样本采集时间点无显著相关性。耐药性测定发现Pm及Mh分离株对多数青霉素类、氨基糖苷类及林可胺类抗生素具有耐药性，对头孢菌素类及喹诺酮类抗生素较为敏感。耐药基因检测显示，Pm及Mh分离株中β-内酰胺类基因(bla_TEM)检出率分别为73.91%、90.91%，磺胺类基因(sul2)检出率分别为69.57%、18.18%，仅1株Mh检出氨基糖苷类基因(aadA25、aadB)，部分分离株的耐药表型与所选择测定的耐药基因间存在差异。所有Pm及Mh分离株均具有致病性，毒力基因检出发现，Pm分离株均能检出tonB、hsf-1、nanB、oma87、tbpA等毒力相关基因，Mh分离株中毒力基因gapA、dnaN检出率为100%，lktA、plpB、tbpB基因检出率均为82%，并未检出ptfA。结论 长途运输到新养殖场的犊牛群所携带的Pm和Mh在生化特性及耐药性等方面呈现出多样性，这给饲养期Pm和Mh感染的防控带来了较大挑战。该研究为运输后犊牛Pm和Mh感染的防控策略制定提供了参考依据。

摘要:目的 研究群体感应系统(quorum sensing, QS)相关调控子AphA、ToxR和QsvR对副溶血弧菌磷酸二酯酶GepA编码基因gepA表达的调控关系。方法 提取野生株(wild type, WT)和aphA、toxR、qsvR突变株的总RNA，通过实时定量PCR (quantitative real-time PCR, qPCR)初步分析QS相关调控子对gepA的转录影响；将gepA上游调控区DNA序列克隆入pBBRlux质粒无启动子区的表达生物冷光基因luxCDABE上游，并将lux重组质粒分别导入WT和突变株中，采用lux报告基因融合实验进一步研究QS相关调控子对gepA的调控作用；采用引物延伸(primer extension)法定位gepA的转录起始位点和核心启动子区，并根据引物延伸产物丰度判断QS相关调控子对gepA的调控关系；将gepA的调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒中β-半乳糖苷酶基因上游获得LacZ重组质粒，将LacZ重组质粒分别转化入含有pBAD33或pBAD33-qsvR的大肠杆菌EC100 λpir中，采用LacZ报告基因融合实验研究在异体宿主中QS相关调控子对gepA转录的调控方式；PCR扩增gepA上游调控区DNA序列，同时表达并纯化QS相关调控子的His重组蛋白，采用凝胶阻滞实验(electrophoresis mobility shift assay, EMSA)研究QS相关调控子是否直接调控gepA的表达。结果 低密度条件下，qPCR结果显示ΔaphA和ΔtoxR中gepA的转录水平明显低于WT，表明AphA和ToxR激活gepA的转录；lux报告基因融合实验显示，ΔaphA和ΔtoxR中gepA的启动子区转录活性明显低于WT，进一步表明AphA和ToxR促进gepA的转录；引物延伸结果显示，gepA的转录起始位点位于起始密码子ATG上游第30 bp的A，且其转录活性受到AphA的激活；EMSA结果显示，His-AphA和His-ToxR均不能与gepA的调控区DNA序列结合。高密度条件下，qPCR和引物延伸实验结果均显示QsvR抑制gepA的转录；EMSA实验结果显示，His-QsvR直接结合在gepA的启动子区DNA序列上；双质粒报告基因融合实验显示，QsvR可以抑制EC100 λpir中gepA的启动子区转录活性。结论 AphA和ToxR间接激活，而QsvR直接抑制gepA的转录。因此，gepA在低密度条件下转录水平较高，高密度时转录水平明显下降。

摘要:目的 采用微生物体外发酵技术，以低聚果糖(fructooligosaccharides, FOS)为对照，研究甘露低聚糖(mannanoligosaccharides, MOS)对断奶仔猪肠道微生物体外发酵特性及菌群结构的影响。方法 以仔猪空肠与结肠食糜微生物作为接种物，分别以FOS和MOS为底物，在0、6、12、24、48 h这5个时间点测定微生物产气量和发酵液pH，并收集每个时间点的发酵液用于后续微生物分析。结果 在体外空肠微生物发酵过程中，MOS组发酵液pH和产气量均显著高于FOS组(P<0.05)；发酵24 h时，与FOS相比MOS极显著提高了乙酸、丙酸及总短链脂肪酸(short-chain fatty acids, SCFAs)的含量(P<0.01)；MOS组甲酸产量极显著低于FOS组(P<0.01)；发酵48 h时MOS组乳酸含量极显著低于FOS组(P<0.01)。在体外结肠微生物发酵过程中，MOS组产气量显著高于FOS组(P<0.05)；发酵48 h时MOS组甲酸、乙酸、丁酸、总SCFAs和乳酸的产量均极显著高于FOS组(P<0.01)。空肠发酵液16S rRNA基因测序结果显示，发酵48 h时MOS组Shannon和Simpson指数均极显著高于FOS组(P<0.01)，且两组之间微生物菌群组成差异明显。此外，MOS组双歧杆菌属(Bifidobacterium)、黏液乳杆菌属(Limosilactobacillus)和巨球形菌属(Megasphaera)菌属的相对丰度显著高于FOS组(P<0.05)。结论 与FOS相比，仔猪小肠微生物群能够利用MOS显著改善微生物区系，提高Bifidobacterium等有益菌的丰度，增加产气量，促进乙酸等SCFAs的产生，提示MOS具有改善仔猪小肠微生态的潜力。

摘要:目的 解析食异源物鞘氨醇菌(Sphingobium xenophagum) C1的类UrcA家族膜蛋白Chr1_2170的表达策略、DNA结合特性，及其在重金属响应与转录调控中的功能。方法 采用密码子优化、双信号肽引导以及同源分子伴侣共表达策略，在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中对Chr1_2170膜蛋白进行表达与纯化；构建蛋白结合基因组DNA片段的功能性启动子文库，筛选Chr1_2170的互作元件；利用Chr1_2170-Luc报告系统分析Chr1_2170的重金属响应特性。结果 成功实现Chr1_2170膜蛋白在E. coli BL21(DE3)中的异源表达与纯化；筛选并鉴定出6个Chr1_2170特异性结合的启动子区域，其保守基序为5′-AATXGCGXGTA-3′；结合基因功能注释发现Chr1_2170蛋白调控β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、双组分系统ATP结合蛋白、DNA拓扑异构酶IV亚基B、丝氨酸水解酶等多个基因的表达。Chr1_2170对Cu²⁺ (1-80 μmol/L)、Zn²⁺ (1-80 μmol/L)、Ba²⁺ (1-150 μmol/L)表现出剂量依赖性响应。结论 Chr1_2170不仅可作为重金属感应元件，还可作为多功能转录调控因子，通过识别特定DNA序列调控相关基因的表达在细菌环境适应性与应激响应中发挥重要作用。

摘要:目的 针对内蒙古盐渍化土壤制约苜蓿生产的问题，从该地区苜蓿根瘤中筛选耐盐能力强、促生效果优的根瘤菌，明确其系统发育地位与功能潜力，为开发本地化苜蓿高效共生结瘤的根瘤菌菌剂提供菌种资源和理论依据。方法 在内蒙古自治区采集6个不同盐碱区域的土壤，通过捕获法获取土著苜蓿根瘤菌，分离纯化后采用16S rRNA基因序列分析鉴定菌株分类地位；通过结瘤试验、固氮/解磷/解钾能力测定、产吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)与胞外多糖含量检测等评价促生功能；结合种子萌发试验与耐盐盆栽试验测定菌株缓解盐胁迫的效果。结果 共分离出250株菌株，其中苜蓿根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)占90.8% (227株)；筛选出8株高效结瘤菌株(1B1Y、1B2Y等)，均具备固氮与解钾能力，部分菌株(如2B3Y、9B3Y)可解有机磷、产铁载体；9B3Y的IAA分泌量最高(67.5 mg/L)，16C1Y的胞外多糖含量最高(2.684 g/L)；在盐胁迫(0.4% NaCl)条件下，2B3Y处理组苜蓿地上部鲜重较盐水对照组增长29%，且显著缓解种子萌发抑制(根长提升明显)。结论 筛选获得的菌株(尤其是2B3Y)能通过固氮、分泌IAA与胞外多糖等机制有效缓解盐胁迫对苜蓿的抑制作用，有望应用于内蒙古盐渍化土壤的苜蓿生产与土壤改良。

摘要:目的 探讨Kelch样ECH相关蛋白1 (Kelch-like ECH-associated protein 1, KEAP1)对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1, HSV-1)复制的影响，为抗单纯疱疹病毒研究提供理论依据。 方法 通过qPCR和Western blotting试验检测人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)感染HSV-1后KEAP1-NRF2信号通路及病毒分子的mRNA和蛋白表达情况。构建KEAP1沉默和过表达的ARPE-19细胞株，采用Western blotting检测KEAP1沉默和过表达对核因子红细胞2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, NRF2)信号通路的影响。用KEAP1沉默和过表达细胞株感染HSV-1，采用qPCR检测病毒mRNA表达变化，采用免疫荧光和Western blotting检测病毒蛋白表达变化，采用空斑形成试验检测病毒滴度变化。用KEAP1沉默细胞株感染HSV-1，采用Western blotting检测不同时间点NRF2信号通路和病毒蛋白的表达情况。 结果 KEAP1沉默可激活NRF2信号通路，促进HSV-1的复制；KEAP1过表达可下调NRF2信号通路，抑制HSV-1的复制。这一结果与先前研究中关于NRF2信号通路上调及活化可抑制HSV-1复制的结论相矛盾。进一步研究发现，KEAP1沉默诱导的NRF2上调在HSV-1感染后受到显著抑制。 结论 KEAP1在宿主细胞抗HSV-1感染过程中发挥重要作用，其与NRF2的相互作用在抗病毒免疫应答中具有复杂的生物学功能。

摘要:目的 探究霍氏假单胞菌M11与巨大芽孢杆菌M28对土壤低肥力胁迫下玉米光合特性的调控作用及生理机制差异。方法 开展盆栽试验，设置正常土壤对照(control check, CK)、低养分处理(low nutrient treatment, LNT)及低养分接种处理(M11+LNT、M28+LNT)。于玉米抽雄期测定土壤养分、植株生长指标、气体交换参数、叶绿素荧光特性及快速叶绿素荧光诱导动力学(O-J-I-P chlorophyll a fluorescence transient, OJIP)曲线，于成熟期测定产量。结果 M11显著提高了土壤有效磷、速效钾和有机质含量，降低了电导率；M28显著提升了土壤全氮含量。2种接种处理均能显著促进玉米生长，提高株高、叶面积、SPAD值及生物量；极显著提升净光合速率(net photosynthetic rate, P_n)、气孔导度(stomatal conductance, G_s)、蒸腾速率(transpiration rate, T_r)和水分利用效率(water use efficiency, WUE)，降低胞间CO₂浓度(intercellular CO? concentration, C_i)。荧光参数显示最小荧光(minimal fluorescence, F_o)降低，最大光化学效率(maximum quantum yield of PSII, F_v/F_m)、实际光化学量子产量(actual quantum yield of PSII, Φ_PSII)、表观光合电子传递速率(electron transport rate, ETR)、光化学淬灭系数(photochemical quenching, qP)和基于激发能压力的光化学淬灭系数(fraction of open PSII centers based on excitation energy, qL)显著提高，非光化学淬灭系数(non-photochemical quenching, NPQ)无显著变化。OJIP曲线表明接种处理未出现K点，J点荧光降低，I点和P点荧光提高，相对可变荧光的差异动力学ΔV_t分析证实菌株同步优化光系统II (photosystem II, PSII)供体侧与受体侧的电子传递，I-P相振幅增大表明光系统I (photosystem I, PSI)活性增强。快速叶绿素荧光诱导动力学分析(junction-intermediate-peak test, JIP-test)参数显示，接种处理显著提高了以吸收光能为基础的性能指数(performance index based on absorbed light energy, PI_ABS)、以单位面积为基础的性能指数(performance index on a cross-section basis, PI_CS)、捕获的激子将电子传递到电子传递链中超过Q_A的其他电子受体的概率(probability that a trapped exciton moves an electron into the electron transport chain beyond Q_A, Ψ_o)、电子传递的量子产额(quantum yield for electron transport, φ_Eo)和单位反应中心捕获的用于电子传递的能量(electron transport flux per RC, ET_o/RC)，降低了单位反应中心耗散的能量(dissipated energy flux per cross-sectional area, DI_o/RC)和用于热耗散的量子比率(quantum ratio for dissipated energy, φ_Do)。最终，M11和M28处理使玉米鲜重较LNT组分别显著提高30.61%和22.64%。干重分别提高26.68%和23.41%。结论 M11主要通过提高土壤有效磷、速效钾含量直接优化能量代谢与气孔运动；而M28主要通过提升土壤全氮含量，侧重于稳定光合机构结构。二者共同保护光合机构完整性并优化光系统电子传递效率，显著增强了低肥力胁迫下玉米的光合性能与产量，为微生物菌剂在绿色增产中的应用提供了理论支持。

摘要:目的 从太子参中分离出对番茄枯萎病具有较强生防潜力的河北链霉菌(Streptomyces hebeiensis) JL9001，解析其全基因组序列与功能注释信息，挖掘其次级代谢产物的基因信息，为番茄枯萎病的生物防治提供优良菌种资源及理论依据。方法 采用平板划线法研究不同培养基上菌落的形态，利用平板对峙法探究菌株JL9001对尖孢镰孢菌的拮抗效果；通过萃取发酵粗提物，运用微量稀释法探究其代谢产物对尖孢镰孢菌的活性；采用发酵液灌根法评估菌株JL9001对番茄枯萎病的防治效果。对菌株JL9001进行全基因组测序，并运用相关软件对测序数据进行种属鉴定、基因预测、功能注释以及次级代谢产物合成基因簇预测等。结果 菌株JL9001在SIM培养基上生长产孢效果最佳。拮抗试验表明，其对尖孢镰孢菌菌丝生长的抑制率达40.18%；在1 000 μg/mL浓度下萃取的代谢粗提物能够完全抑制尖孢镰孢菌。盆栽试验表明，浇灌JL9001发酵液后第13天对番茄枯萎病的抑制率达51.61%。菌株JL9001基因组序列总长为7 700 822 bp，G+C含量为71.46%，总基因数为6 589个；同时预测到27个次级代谢产物合成基因簇，其中包括萜烯、聚酮化合物以及铁载体等具有潜在抗菌活性的代谢产物。结论 本研究通过拮抗和盆栽试验表明，菌株JL9001可有效抑制番茄枯萎病的发生。对菌株JL9001基因组的构成和功能基因信息进行分析，为探究抗菌性天然产物的抑菌机制、分析其次级代谢产物合成基因簇以及评估链霉菌次生代谢产物的潜力奠定了基础。

摘要:目的 Tad菌毛广泛分布于革兰氏阴性菌，与多种病原体的毒力相关。目前，关于副溶血弧菌Tad菌毛的研究极少。本研究旨在揭示Tad菌毛促胰液素CpaC (VP2419)对副溶血弧菌生物学功能的影响。方法 以副溶血弧菌野生株SH112为基础，构建cpaC基因缺失株(ΔcpaC)及互补株(CΔcpaC)，比较各菌株的生物被膜形成能力、细菌竞争力、集群与泳动能力、细胞黏附与毒性、小鼠毒力、组织定殖及病变情况的差异。结果 在细菌环境适应方面，与野生株(WT株)相比，缺失株ΔcpaC的细菌竞争力、运动性和生物被膜形成能力均显著下降。在致病性方面，缺失株ΔcpaC在细胞黏附、细胞毒性，以及小鼠毒力、组织定殖和病变程度上较WT株均显著降低。结论 CpaC作为副溶血弧菌Tad菌毛的组分，参与多种关于环境适应与致病性的功能，包括竞争能力、生物被膜形成、运动性，以及细胞黏附与毒性、组织定殖等，为深入理解Tad菌毛的生物学功能提供了重要依据。

摘要:目的 以娄彻氏链霉菌( Streptomyces rochei) D74为材料，系统分离纯化其菌丝体多糖( Streptomyces rochei polysaccharide, SRP)，解析其精细结构，并评价纯化多糖组分对丹参毛状根生长及丹参酮生物合成的影响及其作用机制。 方法 采用热水浸提法提取粗多糖，经乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白后依次通过DEAE-52阴离子交换柱与Sephadex G-100凝胶柱进行纯化。运用傅里叶变换红外光谱 (Fourier transform infrared spectroscopy, FT-IR)、高效液相色谱-质谱联用(high performance liquid chromatography-mass spectrometry, HPLC-MS)及核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)等技术对主要活性组分SRP-W-2的理化性质及结构进行系统表征。进一步通过测定丹参毛状根生物量、丹参酮含量及关键合成基因表达水平，评估SRP-W-2对毛状根生长与丹参酮合成的调控作用。 结果 SRP-W-2的得率为2.41%，主要由葡萄糖与半乳糖组成(物质的量比为12.53:1)。结构解析表明，SRP-W-2的主链由→4)-α- d-Glc p-(1→和→4)-α- d-Gal p-(1→单元构成，分支点位于→4,6)-α- d-Glc p-(1→和→4,6)-α- d-Gal p-(1→，分支结构为α- d-Glc p-(1→4)-α- d-Glc p-(1→。生物活性实验显示，SRP-W-2可显著促进丹参毛状根生物量与丹参酮类成分的积累。在50 mg/L SRP-W-2处理15 d后，毛状根干重提升37.52%；隐丹参酮 (cryptotanshinone, CT)、二氢丹参酮I (dihydrotanshinone I, DT-I)、丹参酮I (tanshinone I, T-I)和丹参酮IIA (tanshinone IIA, T-IIA)含量分别提高至对照组的19.0倍、6.4倍、2.8倍和4.8倍。基因表达分析进一步表明，SRP-W-2可上调丹参酮合成途径关键基因 HMGR、 DXS、 DXR和 GGPPS的表达。 结论 娄彻氏链霉菌D74来源的多糖组分SRP-W-2可同步促进丹参毛状根的生长与丹参酮的生物合成，具备作为高效诱导剂的潜力，为丹参资源的开发提供了新策略。

摘要:目的 对一株分离自病死仔猪扁桃体、具有多重耐药表型的链球菌进行生物学表征及基因组分析以揭示其表型和基因型特征。方法 取病死仔猪扁桃体组织研磨液接种于链球菌增菌培养基进行增菌培养；将增菌液接种至哥伦比亚血琼脂培养基进行链球菌分离培养。运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、生化鉴定系统及16S rRNA基因测序进行种属鉴定；通过稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations, MIC)；利用Illumina二代测序平台完成全基因组测序；借助ResFinder平台分析耐药基因，并通过多序列比对分析青霉素结合蛋白(penicillin-binding proteins)基因的变异情况。结果 经16S rRNA基因系统发育分析，该分离株鉴定为鼠口腔链球菌(Streptococcus orisratti)。药敏试验显示，该菌株对青霉素G、红霉素、克林霉素、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑耐药，对利奈唑胺不敏感。基因组分析显示，该菌株携带大环内酯类和林可酰胺类耐药基因ermB以及恶唑烷酮类耐药基因optrA，且其青霉素结合蛋白编码基因多位点发生突变。结论 本研究首次报道了一株同时携带ermB与optrA基因且对青霉素耐药的鼠口腔链球菌，揭示了猪源链球菌菌株具备获得多重耐药基因的能力，应关注动物源链球菌的耐药性和传播风险。

摘要:目的 明确苦味西葫芦(Cucurbita pepo cv Dayangua, CPD)对机体缺氧的改善能力，并探究其可能通过调节肠道菌群及代谢产物发挥作用的潜在机制。方法 将雄性昆明小鼠随机分为2组：对照组(normoxia ddH₂O, ND)、CPD干预组(normoxia CPD, CPD)。CPD干预组剂量为800 mg/(kg·d)，对照组给予相同体积的ddH₂O，连续给药15 d于最后一次给药1 h后将各组小鼠置于广口瓶内，观察并记录小鼠在广口瓶中的生存时间。在最后一次给药前收集小鼠粪便，进行16S rRNA基因扩增子测序和靶向代谢组检测，并开展肠道微生物和代谢物的关联性分析。结果 与对照组相比，CPD干预后显著延长了小鼠在缺氧条件下的存活时间。CPD干预可改变小鼠肠道菌群结构组成。线性判别分析效应大小(linear discriminant analysis effect size, LEfSe)分析发现，ND组与CPD组之间存在显著差异的细菌类群：CPD组中芽孢杆菌门(Bacillota)、乳杆菌属(Lactobacillus)、别样杆菌属(Alistipes)等微生物的相对丰度较高。与小鼠生存时间呈正相关的菌属有副普雷沃氏菌属(Paraprevotella)、乳杆菌属(Lactobacillus)等。靶向代谢组学表明CPD干预后有9种代谢物上调，31种代谢物下调，其中代谢物棕榈油酸(palmitoleic acid)、乙醛酸(glyoxylic acid)、十一烷酸(hendecanoic acid)、l-天冬氨酸(l-aspartic acid)、O-琥珀酰高丝氨酸(O-succinyhomoserine)、尿囊酸(allantoic acid)在CPD干预后显著富集，并且与小鼠生存时间呈显著正相关。通过差异代谢物KEGG富集分析，色氨酸代谢通路和甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路的富集程度最高。结论 CPD干预可显著延长缺氧小鼠的存活时间。CPD干预富集了包括乳杆菌属在内的有益微生物，并提升了胆碱(choline)、尿囊酸等有益代谢物的水平。这些发现提示调节“肠道微生物-代谢物”轴可能是CPD增强机体缺氧耐受性的机制之一，为开发针对缺氧相关疾病的微生态干预策略提供了理论依据和潜在靶点。

摘要:生物炭可作为非共生固氮菌的优良载体，提高微生物的活性和功能特性。然而，非共生固氮菌和生物炭的耦合机制仍不清楚。目的 探究不同生物炭对非共生固氮菌定殖分布及固氮效率的影响。方法 以定殖于玉米秸秆(S)和椴木枯枝(T)生物炭[粒径分级：>2.00 mm (a)、0.25-2.00 mm (b)、<0.25 mm (c)]的非共生固氮菌为研究对象，分析其比表面积和孔隙度的差异，并监测固氮菌数量、pH、可溶性有机碳(dissolved organic carbon, DOC)、可溶性有机氮(dissolved organic nitrogen, DON)、微生物生物量碳(microbial biomass carbon, MBC)、微生物生物量氮(microbial biomass nitrogen, MBN)及固氮酶活性随培养时间延长的动态变化。结果 固氮菌在秸秆炭上的定殖量分布更均匀，且能更好地发挥固氮作用，其中以0.25-2.00 mm粒径的秸秆炭效果更优。相较于木质炭，0.25-2.00 mm粒径秸秆炭负载菌株处理组的MBC平均含量和固氮酶活性分别提高了82.33%-160.55%和231.46%-356.08%。此外，在整个培养期间秸秆炭处理组的DOC和DON含量也显著高于木质炭处理组，为微生物生长提供了可利用的养分。相关性热图分析表明，酸碱性对非共生固氮菌的定殖数量和固氮酶活性具有显著影响；DOC和MBC与固氮酶活性呈强烈显著正相关(P<0.001)，表明高碳生长环境是非共生固氮菌生长和发挥固氮作用的关键因素。结论 玉米秸秆生物炭(0.25-2.00 mm粒径)有利于非共生固氮菌发挥固氮作用，其通过改善微生物的微生态环境提高了微生物的固氮活性和部分功能特性。

摘要:饲用益生菌对维持畜禽健康、促进畜禽生产具有重要作用。然而，多数益生菌的应用受限于其对动物肠道环境胁迫(酸、胆盐、温度)的敏感性，微囊化包被技术是提升其稳定性的关键手段。目的 以自主分离的具有益生特性的屎肠球菌(Enterococcus faecium) PL84为材料，构建金属-多酚-益生元(Fe-TA-GN)复合包被体系，并验证该体系对PL84的保护效果，为其产业化应用提供技术支撑。方法 通过优化包被参数(Fe³⁺与TA的比例、GN的浓度)，结合电镜观察，同时采用CCK-8法检测包被材料对小鼠肠道上皮细胞(IEC-6)活性的影响。通过酸性、胆盐、温度及模拟胃肠液(SGF/SIF)环境的体外耐受性试验评价包被体系的保护效果。结果 PL84在对数生长期时菌体活性最佳，适用于包被。当Fe³⁺与TA的化学计量比为1:3时PL84-Fe-TA复合颗粒的纳米粒度最小，形成致密的金属-多酚网络；当GN浓度为0.4 mg/mL时Fe-TA-GN保护层的zeta电位最高，结构最稳定。扫描电镜(SEM)观察显示，PL84-Fe-TA-GN表面的保护层均匀连续。体外耐受性实验表明，PL84-Fe-TA-GN在pH 3.0、胆盐浓度0.6%的条件下存活率极显著高于未包被的PL84 (P<0.01)；在60 ℃处理后，其存活率较未包被菌株提升了16.29%，且在人工模拟胃液(simulated gastric fluid, SGF)、模拟肠液(simulated intestinal fluid, SIF)中的存活率分别提升了20.80%、13.53%。包被材料(Fe-TA、GN、Fe-TA-GN)对PL84的活性无显著影响(P>0.05)。结论 当Fe³⁺与TA的化学计量比为1:3、GN浓度为0.4 mg/mL时，金属-多酚-益生元复合包被体系稳定，可显著提升屎肠球菌PL84的环境耐受性，且包被材料具有良好的生物安全性，为菌株PL84的产业化应用奠定了技术基础。

摘要:目的 探究微生物发酵中药YA3D3通过微生物-肠-脑轴改善APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)模型小鼠认知功能的机制。方法 对APP/PS1小鼠分别给予YA3D3水提物(YA3D3-HF)及其微生物发酵产物(YA3D3-MHF)干预90 d，采用16S rRNA基因测序分析肠道菌群结构，气相色谱-质谱联用技术(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)检测粪便短链脂肪酸(short-chain fatty acids, SCFAs)水平，酶联免疫实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法测定脑组织神经递质含量，Morris水迷宫评估认知功能，结合网络药理学与质谱分析明确活性成分及化学基础变化。结果 与模型组(model, BC)及YA3D3-HF组相比，YA3D3-MHF能更显著改善小鼠认知障碍；Morris水迷宫显示YA3D3-MHF-H (MH)组逃避潜伏期最短、穿越平台次数最多，接近正常对照组(control, NM)；ELISA证实MH组脑内5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)、谷氨酸(glutamate, GLU)含量最高；16S rRNA基因测序显示MH组肠道菌群α多样性(Shannon指数约3.2)及有益菌丰度最高，促炎菌丰度最低；GC-MS表明MH组总SCFAs、乙酸、丁酸含量最高。质谱分析显示YA3D3-MHF成分极性降低且活性峰增高。结论 YA3D3-MHF通过调控肠道菌群-SCFAs-神经递质轴改善AD小鼠认知功能，效果优于传统水提物，为靶向肠-脑轴的AD干预提供实验依据。

摘要:目的 评估槲皮素在体外对阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)的抑菌作用，并探究其诱导真菌凋亡的分子机制。方法 依据CLSI M27-A3方案测定槲皮素对9株T. asahii浮游菌及生物膜形成的抑制作用。在此基础上检测槲皮素干预后菌株细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (cysteinyl aspartate-specific proteinase 3, Caspase-3)活性的变化，随后利用转录组测序分析差异表达基因。结果 槲皮素对T. asahii的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations, MICs)为8-32 μg/mL，且能有效抑制其生物膜形成。细胞实验表明，槲皮素通过诱导ROS累积、降低MMP并激活Caspase-3引发细胞凋亡。转录组数据从基因表达水平进一步证实了上述机制。结论 槲皮素主要通过诱导氧化应激介导的细胞凋亡发挥抗T. asahii作用。

摘要:目的 兼具光合与摄食功能的混合营养策略在单细胞真核微藻中广泛存在，其在食物网能量流动以及元素生物地球化学循环中发挥着重要作用。研究自然水体中混养微藻的种类构成存在技术难题，因此提升现有手段以准确揭示其多样性是该领域亟待解决的科学问题。方法 通过添加荧光猎物标记物并开展摄食实验，追踪群落中的摄食型微藻；利用荧光激活流式细胞分选技术在单细胞水平上捕捉目标生物，结合基因组扩增与18S rRNA基因鉴定其物种，最终建立了一种单细胞分选与基因组扩增相结合的FACS-MDA联用方法。结果 利用该方法检测了来自我国淡水与海水环境中多个样品的混养微藻，获取了隶属于6纲12属的20个摄食型微藻物种，以及1纲3属的异养摄食者，证实了该方法的有效性。结论 本研究将FACS-MDA联用技术应用于天然水体微藻功能群鉴定，所建立的荧光激活分选和单细胞测序技术在微生物生态学领域具有广泛的应用前景，有助于加深对环境微藻功能类群及其原位摄食活动的认知。

摘要:目的 评价培养基浓度、土壤悬液稀释度及土壤类型对细菌高通量培养结果的影响，为苏打盐碱土微生物资源的高效挖掘提供理论依据和技术支撑。方法 以盐碱荒地与玉米地表层土壤为研究对象，设置1×TSB、1/5×TSB、1/10×TSB 3种培养基浓度，结合最适和2×最适土壤悬液稀释度，开展细菌的高通量分离培养与分子鉴定，系统分析不同处理条件下细菌的培养偏好性。结果 2种土壤中原位细菌群落的优势门类为假单胞菌门(Pseudomonadota)、放线菌门(Actinomycetota)、酸杆菌门(Acidobacteriota)、芽孢杆菌门(Bacillota)和绿屈挠菌门(Chloroflexota)；前10个优势属中仅芽孢杆菌属(Bacillus)和红色杆菌属(Rubrobacter)为可培养类群。高通量培养共获得2 256个阳性体系，纯菌孔占比达79.3%；从中鉴定出153个扩增子序列变体(amplicon sequence variants, ASVs)，隶属于4门52属。平均每100个纯菌孔可获得6.8个ASVs或2.3个属。1/10×TSB培养基处理的纯菌孔占比最高，而1×TSB培养基的ASVs分离效率最优；2×最适稀释度在纯菌比例和分离效率方面均优于最适稀释度。盐碱荒地土壤在纯菌比例、ASV及属水平分离效率方面均高于玉米地土壤，且其特有ASVs数量更多。高通量培养获得的高频属包括假单胞菌属(Pseudomonas)、嗜氢菌属(Hydrogenophaga)、芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、食酸菌属(Acidovorax)和节杆菌属(Arthrobacter)，其中仅Bacillus为原位土壤中的优势属。结论 高通量培养技术是快速获取苏打盐碱土细菌纯培养菌株的有效手段。相较于旱地土壤，盐碱荒地中可获得更高多样性的可培养细菌；适度降低培养基浓度和提高土壤悬液稀释度有助于提升纯菌分离效率和物种多样性。然而，多数原位优势类群难以通过单一类型培养基获得，未来需进一步拓展培养条件多样性以提高土壤优势细菌的可培养性。

摘要:目的 通过构建5种含P_tac启动子的重组质粒pHX01-pHX05 (组合基因asd、lysC、ectA、ectB、ectC)，导入坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas campaniensis) XH26，构建高产工程菌株，并结合响应面法(response surface methodology, RSM)优化培养条件提高四氢嘧啶(ectoine)的积累量。方法 重组质粒经大肠埃希氏菌(Escherichia coli) S17-1(λ-pir)接合转移至菌株XH26，利用庆大霉素(50 μg/mL)筛选阳性克隆子；以0.2 mmol/L IPTG诱导表达重组菌株，用HPLC检测四氢嘧啶的积累量；采用单因素试验、Plackett-Burman与Box-Behnken设计优化关键变量因素(NaCl、蛋白胨、l-谷氨酸钠、葡萄糖)。结果 构建了5株重组菌株(XH26/pHX01-pHX05)。采用MG培养基培养重组菌株，发现菌株XH26/pHX04 (asd-lysC-ectA-ectB)的四氢嘧啶积累量最高，达(1.32±0.04) g/L；菌株XH26/pHX05和菌株XH26/pHX03次之，四氢嘧啶积累量分别为(1.19±0.07) g/L和(1.07±0.08) g/L；而XH26/pHX02积累量较低，为(1.02±0.14) g/L。利用响应面法优化培养基的关键成分，确定最优条件为NaCl 116.08 g/L、蛋白胨16.30 g/L、l-谷氨酸钠169.57 g/L、葡萄糖15.53 g/L。在此条件下，重组菌株XH26/pHX04的四氢嘧啶积累量提高至(1.81±0.02) g/L，较野生型菌株XH26显著提高了301.56%。结论 以坎帕尼亚盐单胞菌为“底盘细胞”，利用强启动子组合过表达基因asd、lysC、ectA/B，辅以响应面法优化重组菌株的培养基条件，可显著提高重组菌株的四氢嘧啶积累量，为后续工业化生产提供了一定的技术参考依据。