摘要:用RTPCR方法从中国标准强毒株石门毒的细胞培养物中 扩增获得了其结构蛋白E2基因cDNA，将之克隆到pGEM5Z T载体，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并推导出其对应氨基酸序列，与几个代表毒株Alfort株、Brescia株和C株相应序列进行比较，所测核苷酸序列与各株的同源性分别为84.7%、92.6%和95.2%，氨基酸序列的同源性分别为89.4%，92.6%和94.6%；将此E2片段亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1，构建表达CSFV E2蛋白的重组质粒pcE2，用脂质体转染法将pcE2导入cos7细胞进行瞬时表达，用针对E2蛋白的特异性单抗以间接免疫荧光法检测，结果E2蛋白在cos7细胞中获得了正确表达，随之将pcE2质粒DNA进行小鼠肌内接种免疫，ELISA法检测证实在免疫后2周和4 周的小鼠体内可诱导出较为明显的阳性血清，并高于E2单抗的阳性对照，病毒中和试验也表明DNA免疫后小鼠体内可诱导产生CSFV中和抗体；同时构建了能在昆虫细胞Sf9中表达GSTE2和GSTGFPE2融合蛋白的重组杆状病毒；上述研究结果为研制针对CSFV的DNA疫苗，亚单位疫苗及其诊断试剂打下了基础。
