点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶基因的克隆与表达

摘要:

用活性筛选法从产气单胞菌点状亚种ST7833 (Aeromonas puctata subsp.puctata ST7833)的基因组中克隆了脯氨酰内肽酶 (Prolyl Endopeptidase,简称apPEP)的基因，测定了含有PEP基因的33kb DNA片段的序列，第202092bp编码了690个氨基酸组成的脯氨酰内肽酶，经检索是一种新的PEP基因。并构建了一株组成性高效表达PEP的基因工程菌BL21/pGEMPEP。BL21/pGEMPEP在 YH培养基中apPEP的表达量占菌体总蛋白的30%左右，活力是野生菌的112倍，表达产物主要为可溶性的胞内蛋白，约5%分泌到胞外。非还原SDSPAGE显示为单体，分子量为76kD，与基因序列预测的分子量一致。试管培养后纯化得到了纯度大于90%的重组脯氨酰内肽酶，比活力为67U/mg。

关键词:脯氨酰内肽酶， 大肠杆菌， 克隆， 高效表达

Abstract:

Key words:脯氨酰内肽酶， 大肠杆菌， 克隆， 高效表达