摘要:用\%Bam\%HⅠ和\%Sac\%Ⅰ双酶切质粒pCM1\|1，获得酵母的MTI基因片段，用非放射性地高辛标记作为探针。提取桑蚕肥苏蚕卵的总DNA，分别用\%Eco\%RⅠ、\%Bam\%HⅠ和\%Hin\%dⅢ酶切，与MTI探针进行Southern杂交，出现较强的杂交信号。然后用\%Eco\%RⅠ完全酶切桑吞的总DNA，电洗脱法回收1～6kb的染色体片断，与\%Eco\%RⅠ酶切的M13-载体以3∶1比例连接，转化受体菌DH5α。筛选到4 000多个白色转化子，与探针MTI进行Southern杂交筛选阳性转化子，选择到有强杂交信号的三个转化子［编号为T1(pZHC\|1)\,T5(pZHC\|5)\,T7(pZHC\|7)\]。用12种限制性内切酶对pZHC\|5重组质粒进行酶切分析表明插入片段约12kb，在基因内有一个\%Hin\%dⅢ位点。抗性测定表明受体菌DH5α在含有50mmol/L CuSO\-4的培养基上生长，在含有52mmol/L CuSO\-4的培养基上不生长，而转化子确能在含有52mmol/L CuSO\-4以上的培养基上生长。上述研究结果表明12kb左右的插入片段含有桑吞的金属硫蛋白基因。
