双价杀虫蛋白基因在荧光假单胞菌中的表达及增效

摘要:

利用广宿主质粒载体pJMS6αlac将苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分别及一起进行克隆，将重组质粒导入能在多种作物上定殖、对植物病菌有良好抑菌和防治作用的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)P303菌株，分别得到工程菌株IPP101、IPP201和IPP202。PCRRFLP和Southern blot检测均证明目的基因已经导入了工程菌。SDSPAGE电泳显示工程菌中存在明显的Cry1Ac蛋白带；透射电镜观察发现含cry1Ac基因的两个菌株IPP101和IPP202中杀虫蛋白形成了典型的菱形晶体和蛋白包含体，而在野生P303菌株中均无这些结构。这些结果说明，工程菌中cry1Ac基因得到了很好表达。室内杀虫试验表明：工程菌对棉铃虫初孵幼虫的致死中浓度(LC50)，只含cry1Ac的IPP101为000812mL/g饲料，只含cry2Aa的IPP201为002604mL/g饲料，含双基因的IPP202为000186mL/g饲料；HD73为000170mL/g饲料。cry1Ac和cry2Aa双基因表达产物具有显著增效作用，共毒系数达3328。

Abstract: