邻单胞菌邻苯二酚1，2双加氧酶基因(\%tfd\% C)的克隆及其在大肠杆菌中表达

摘要:

根据已报道的邻苯二酚1，2双加氧酶基因(tfd C)序列，设计PCR引物，从一株邻单胞菌(Plesiomonas)的pL1质粒上扩增到tfd C基因片段，连接到pGEM\|T载体上，并转化大肠杆菌JM109菌株，筛选到阳性克隆。序列分析结果表明，PCR产物全长801bp，有一个阅读框，编码255个氨基酸，与增氧产碱菌(Alcaligenes eutroplus)的tfd C基因相比，在693位相差一个碱基(C→A)，导致编码产物在228位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到pBluescriptII KS质粒载体上，筛选到阳性克隆pBt12G,在大肠杆菌JM109中可表达邻苯二酚1，2双加氧酶(C120)的活性；将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到pET\|30a质粒载体上，筛选到阳性克隆pET30A,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中可表达目的蛋白。C120是芳香族化合物降解过程中的关键酶，为了进一步在草坪草中表达tfd C基因，利用草坪草降解环境中芳香族污染物，将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG，突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C120的活性。

Abstract: