摘要:将苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B与耐盐有关的4kb ClaⅠ DNA片段克隆在pML122上，用HindⅢ酶切下其2.4kb DNA片段，回收后与pBBR1\|MCS2连接，然后转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α，筛选到转化子GS2〖DK〗。将残留在pML122上16kb ClaⅠ\|HindⅢ DNA片段连同质粒一起回收，让其自连，转化大肠杆菌S17-1，得到转化子GS0。以GS0为供体，042B的盐敏感突变株GZ17为受体，进行二亲本杂交，没有得到接合子。以GS2为供体，GZ17为受体，在辅助质粒pRK2013的协助下，进行三亲本杂交，筛选到接合子GG2，获得2.4kb HindⅢ与耐盐有关的DNA片段。将此片段连接到测序载体pGEM\|7Zf(+)上进行测序。测序结果表明，该24kb HindⅢ DNA片段含有3个开放阅读框(ORF)。在此基础上再一次亚克隆，获得19kb与耐盐有关的DNA片段。
