枯草芽孢杆菌寡聚1，6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要:

本研究用鸟枪法构建了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HB002的基因组文库，经平板法筛选得到了六株能水解合成底物对硝基苯αD葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆，经鉴定均含克隆了寡聚1，6葡萄糖苷酶基因的重组质粒(命名为pHBM001～pHBM006)。选择pHBM003，对其插入片段测序分析，此片段内有一编码561个氨基酸的开放阅读框，该蛋白质的计算分子量为65985kD。HB002的寡聚1，6葡萄糖苷酶的氨基酸序列与Bacillus sp.和凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)的寡聚1，6葡萄糖苷酶的氨基酸序列一致性分别为81%、67%，相似性分别为89%、79%。从pHBM003中扩增出寡聚1，6葡萄糖苷酶基因，克隆到pBV220上，转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α，得到三个能水解对硝基苯αD葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆HBM0031～HBM0033，将此三个菌株热诱导表达，SDSPAGE电泳可检测到特异表达的蛋白质，其中HBM0031、HBM0032表达的蛋白约66kD，为完整的寡聚1，6葡萄糖苷酶，而HBM0033表达的蛋白质偏小；表达的蛋白质均有寡聚1，6葡萄糖苷酶活性。

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