伪狂犬病毒gI基因的克隆表达及其对病毒增殖的影响

摘要:

从伪狂犬病毒(PRV)国内地方分离Ea株基因组DNA片段中克隆了完整的gI基因，序列分析结果表明，gI基因编码区全长1101bp,可编码366个氨基酸残基，二级结构预测具有典型I型膜蛋白特征。与GenBank中收录的国外Rice株的同源比较发现，Ea株gI在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处突变，尤其是潜在胞浆区中连续两个碱基的缺失导致移码突变，致使gI基因的读码框架后移，从而导致Ea株gI较rice株长16个氨基酸残基。将gI基因克隆到真核表达载体pcDNA31+中的人巨细胞病毒早期启动子下游，构建的真核表达质粒转染PK15细胞，间接免疫荧光检测证实gI获得正确表达。进一步测定天然缺失gI的PRV弱毒Bartha株在表达gI细胞系和空白载体转染的对照细胞系中的蚀斑形成单位(pfu)和组织细胞培养半数感染量(TCID50)，结果显示：Bartha株在表达gI细胞系中的pfu和TCID\-\{50\}分别为对照细胞系的164%和200%。说明gI具有促进病毒增殖的功能。

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