汉森酵母表达载体的构建和人血管生成抑制素基因的表达

摘要:

汉森酵母(H.polymorpha)是一类能以甲醇为唯一碳源和能源的甲基营养酵母，具有高表达外源基因、易于高密度发酵和产业化的特点。应用PCR技术扩增汉森酵母甲醇氧化酶(Methanol oxidase MOX)基因启动子和转录终止序列，并与汉森酵母Leu基因(Hpleu2)和人血管生成抑制素基因一起重组进大肠杆菌质粒pSP72，构建了整合型表达载体pSMA17，采用LiAc法将pSMA17转入汉森酵母A16(leu)，筛选出阳性转化子H.polymorpha A16(pSMA17)。转化子在YPGE培养基中培养至对数生长后期，用甲醇进行诱导表达。ELISA和SDSPAGE分析结果证明人血管生成抑制素已获表达，表达产物分泌至培养基中。Western blot结果显示重组的人血管生成抑制素能与抗人纤溶酶原抗血清特异结合，具有免疫原性。

关键词:汉森酵母， 表达载体， 血管生成抑制素， 基因表达

Abstract:

Key words:汉森酵母， 表达载体， 血管生成抑制素， 基因表达