圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶的分离纯化及酶学性质

摘要:

圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶基因naoA在大肠杆菌中获得了成功表达，从含有重组质粒pNA101(pET23b∷naoA)的工程菌株BL21(DE3)中分离纯化了硝基烷类氧化酶，SDSPAGE检测为均一。对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。底物为1硝基丙烷、2硝基丙烷和硝基乙烷时，在04mol/L的磷酸缓冲液中，酶的最适反应pH值为7～8，最适反应温度为48℃～56℃。室温保存6d后，酶的活性保持了43.3%，但对60℃以上的高温敏感。硫醇化合物如巯基乙醇、还原型谷胱甘肽不同程度地抑制酶活性，特别是NADH，其浓度为1mmol/L时，酶活性几乎全部丧失。以1硝基丙烷为底物时，NaoA的Km为357mmol/L，Vmax为0199μmol/(μg.min)。

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