猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因在昆虫细胞中的高效融合表达

摘要:

对杆状病毒BactoBac表达系统的转座质粒pFastbac1进行改造，即在其多角体蛋白启动子下游插入谷胱苷肽S转移酶（glutathioneStransferase, GST）基因，构建GST融合表达转座质粒pFGST。通过转座和转染Sf9细胞，证实该系统能高水平表达GST。采用PCR方法从pMTgp51质粒中扩增截去N端信号肽序列的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）YA株ORF5基因，并将截短的ORF5基因片段克隆到pFGST中，使之与GST融合，构建的重组转座质粒pFGST53转染DH10Bac，提取大分子Bacmid DNA，转染Sf9细胞，获得能表达融合蛋白的高滴度重组病毒rvGST53。rvGST53感染Sf9细胞，SDSPAGE和Western印迹分析表明：与GST融合的ORF5基因在Sf9细胞中获得高效表达，表达产物分子量为45kD，能与抗PRRSV E蛋白单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物免疫小白鼠，经间接免疫荧光检测，免疫血清能使PRRSV YA株感染的MARC145细胞呈较强的荧光着色，证实表达的融合蛋白具有良好的免疫原性。

Abstract: