摘要:乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase EC 6.4.1.2, ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A，该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步，也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌(M. tuberculosis)和天蓝色链霉菌(S. coelicolor)中ACC-α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好，设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约250bp的片段，并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC-α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1797bp，编码一个598个氨基酸的蛋白，推算出的分子量是63,714Da；基因G+C mol%含量为70.1%，符合U32基因结构特征，距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG，并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET28(b)系统构建表达载体，在E. coli BL21(DE3)中实现了accA的诱导表达，产物大部分以可溶形式存在，并通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。Northern Blot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。
