担子菌漆酶的分离纯化及其性质研究

摘要:

采用硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl SepharoseTM6 Fast Flow疏水柱层析等方法，得到电泳纯的漆酶同工酶Lac1,纯化倍数为318.4，活力回收率为18.6％。用SDSPAGE测得该酶分子量为60.3kD，而经质谱分析为55.94kD。最适反应温度为65℃，最适反应pH值为2.2～2.8，酶的等电点pI（室温）为4.02，其N末端序列为AIGPVTDL，用硫酸酚法测得其含糖量为49.2％。25℃条件下，以ABTS(2,2'azinobis(3ethylbenzthiazoline6sulphonate)为底物的Km为17.5μmol/L。该酶在45℃，pH3.0～9.5较稳定。Cu^2＋对酶活有明显的促进作用，Fe^2＋完全抑制酶的活性，Mn^2＋和Ag^＋对酶活无明显影响。DTT（Dithiothreitol,二硫苏糖醇）和NaN3完全抑制酶的活性。Koshland试剂对漆酶的活力影响比较大，色氨酸可能是酶活力的必需基团。

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