伯克霍尔德氏菌（Burkholderia sp.）2-萘酸单加氧酶基因（nmo）的克隆及表达

摘要:

通过酶切连接将Burkholderia sp. JT1500的一段DNA片段(4.8kb)亚克隆到表达载体pUC18上，得到重组子pEK123。测序后的pEK123重组子48kb插入片段的序列已经登陆欧洲EMBL基因库，序列接受号为AJ566333。对这一DNA片段的序列分析显示，此DNA片段含有3个阅读框，且在这3个阅读框5′端发现一启动子特异序列。再用酶切连接方法得到仅含一个阅读框的重组子pXK3，其阅读框长度为1158bp，编码386个氨基酸，与已报道的Ralstonia eutropha HF39羟化酶（单加氧酶，bec）氨基酸序列有64%的同源性。pEK123对2萘酸代谢途径中4个关键底物的转化实验结果显示，其基因产物仅对2萘酸发生加氧转化反应，而且2萘酸浓度有明显的降低，证实此基因是2萘酸单加氧酶基因（nmo）。同时发现其基因产物也可以转化苯甲酸钠。该酶对苯甲酸的加氧转化途径正在研究中。 SDSPAGE结果表明，pXK3、pEK123两重组子中2萘酸单加氧酶表达量并没明显区别，但加氧酶酶活却存在显著的差别。推测在启动子后，单加氧酶阅读框前的两个阅读框的基因产物，对单加氧酶活有促进作用。

Abstract: