人血管能抑素基因的克隆、表达及其表达产物的纯化和生物活性测定

摘要:

以人胎盘脐带组织为材料，提取组织总RNA，用netRTPCR方法合成人血管能抑素cDNA基因，将该cDNA克隆进pSP72载体获得重组质粒pSP72C， DNA序列分析结果与预期序列一致。用BamHⅠ和NdeⅠ双酶切，切下pSP72C上的血管能抑素cDNA，插入pET3c载体的相应位点获得重组表达质粒pETC, 转化E. coli BL21(DE3), SDSPAGE分析显示：在IPTG诱导下，血管能抑素基因获得了高效表达，表达量约占菌体总蛋白的 27.9 %，主要以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤、裂解、蛋白复性以及Sephadex G75凝胶过滤层析等步骤后，获得了纯度达91.4 %的人血管能抑素。CAM实验证明10 μg纯化蛋白就能显著抑制鸡胚新生血管生成。

关键词:血管能抑素， 基因克隆与表达，蛋白纯化，抗血管生成

Abstract:

Key words:血管能抑素， 基因克隆与表达，蛋白纯化，抗血管生成