摘要:马立克氏病病毒（MDV）pp38基因上游是病毒基因组DNA复制原点。在其两侧均含有启动子TATAbox、CAATbox等特征性的保守基元，推测是一个天然的双向启动子。为了在体外验证其双向启动活性，本研究以MDVpp38为报告基因，并将其ORF插入到pUC18中，构建了pUCpp38质粒。将包含该启动子完整区域的789bp序列分别以正反两个方向克隆进pUCpp38质粒中pp38报告基因的上游，获得的重组质粒pProfpp38和pProrpp38。将所获得的重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞（CEF），通过间接免疫荧光试验检测pp38基因的表达以验证该启动子的双向启动活性。结果表明，马立克氏病病毒复制原点区的启动子无论以何种方向插入pUCpp38质粒中，在转染细胞24h内能检测到pp38基因的表达，48h后能获得高效和持续的表达。逐渐缩小该启动子的范围,最终在320bp时，仍能检测到两个方向较强的启动活性。
