共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒

摘要:

应用RTPCR扩增出新城疫病毒F48E8株融合蛋白（F）基因，将其克隆入pGEMT easy vector构建重组质粒pGEMTF并进行测序确证。分别从pGEMT和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株（A/chicken/china/F/1998）血凝素（HA）基因，通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF，其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE/L和合成启动子PS调控。最后将P11LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF，用以转染已预先感染鸡痘病毒282E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞（CEF）。通过在含有Xgal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southern blot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组；间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。

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