摘要:从三角酵母中提取总RNA，反转录后进行PCR扩增得到D氨基酸氧化酶 (DAmino Acid Oxidase, DAAO)基因，经测序可知，与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在99％以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后，与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET28a连接，转化大肠杆菌TOP10F′，并筛选得到重组质粒pETDAAO，转化BL21（DE3）感受态细胞，得到重组大肠杆菌BL21(DE3)/pETDAAO。对重组大肠杆菌中的D氨基酸氧化酶进行了诱导表达，考察了诱导温度、菌浓度、诱导剂IPTG用量以及溶氧等因素对酶活的影响。结果表明，在28℃、菌浓度（OD600）1.0、IPTG浓度1mmol/L时，DAAO酶活最高达23.3U/mL。研究进一步显示，用廉价无毒的乳糖可以替代IPTG进行诱导，当乳糖浓度为2mmol/L，DAAO酶活可达22.7U/mL。经过补料分批培养和乳糖诱导，DAAO酶活可以达到175U/mL。
