摘要:用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因，构建了重组表达质粒pET29a_mpd,将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，得到C末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶，用NiNTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时，最适pH86～8.8，最佳反应温度15℃；Mn2+、Zn2+、Cu2+可使酶活性增加15%～20%，Ca2+、Mg2+微弱地促进酶的作用，Ni2+对酶活性几乎无影响；1mmol/L EDTA·Na2+几乎不影响酶的活性，而10mmol/L EDTA·Na2+对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时，最适pH86。25℃时，该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km为（68.6 ± 5.1）μmol/L，kcat为（45 ± 6 ）S-1；对乙基对硫磷的米氏常数Km为（59.5 ± 6.0）μmol/L，kcat为（8 ± 1） S-1。Kcat/Km表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高。
