摘要:建立一套原位PCR检测方法，联合流式细胞仪作为检测工具，作为基因水平转移研究中的基因监控手段。通过常规PCR反应以确定靶基因的基本扩增参数；细菌菌体经过多聚甲醛PBS液固定和溶菌酶处理后进行原位PCR扩增，产物洗涤后迅速用流式细胞仪进行荧光检测，并辅以荧光显微镜镜检。扩增样品在荧光显微镜的蓝光激发下发出明亮的黄绿色荧光，与空白对照中的无扩增菌体的自发荧光可明显区分。流式细胞仪检测结果也显示，阴性菌与阳性菌的荧光强度有明显区别。完成了对目标细菌的原位PCR扩增，并成功地应用流式细胞仪对原位PCR扩增菌体实施了检测。由此表明isPCR流式细胞仪检测技术在细菌致病基因原位监控上的应用前景。
