D-乳酸脱氢酶基因克隆及其表达

摘要:

构建了一株产D,L-乳酸的乳杆菌（Lactobacillus sp. ）MD1的基因文库。利用乳酸脱氢酶和丙酮酸裂解酶缺陷的Escherichia coli FMJ144作为宿主，在厌氧条件下通过互补筛选获得乳酸脱氢酶基因（ldh），非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（NativePAGE）检测证明其阳性克隆表现出D乳酸脱氢酶（DLDH）活性。核酸序列分析表明，ldhD的ORF编码331个氨基酸残基组成的蛋白质有两个保守区域，其中V147～D176区是NADH的结合位点，R77～E107区据报道是酶的活性部位。该菌株DLDH和D羟基异己酸脱氢酶（DHicDH）属于NADH依赖性脱氢酶家族，ldhD和其他乳杆菌属的ldhD及DHicDH基因和编码的氨基酸序列相似性较低，核酸序列相似性最高达4933%，氨基酸序列相同性最高为42%，是一个新的D乳酸脱氢酶基因。

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