黑曲霉pepB基因缺失菌株的构建及其功能分析

摘要:

以黑曲霉（Aspergillus niger）GICC2773基因组DNA为模板，用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约14kb和下游约13kb两段DNA序列，将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因（hph）表达单元的5′和3′端，构建成重组质粒pMW1pepB，用于通过同源重组靶向破坏基因组中的pepB基因。同源重组则采用原生质体PEG方法，将酶切pMW1pepB得到的线性片段转化A.niger GICC2773菌株，通过潮霉素选择平板得到62个Hgy抗性转化子，然后采用PCR方法从这些抗性转化子中筛选到1个由于同源重组产生的pepB基因缺失突变菌株pepB29。功能分析显示该突变株的酸性蛋白酶活性有明显下降，外源蛋白漆酶的分泌表达有所提高。

关键词:黑曲霉，pepB基因缺失，同源重组，外源蛋白

Abstract:

Key words:黑曲霉，pepB基因缺失，同源重组，外源蛋白