摘要:综合运用cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇(Flammulina velutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA，经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族，与已发表的漆酶基因(AF176230) 的同源性最高，在氨基酸水平为72%。该结构基因命名为glccFv，cDNA命名为lccFv，其序列提交GenBank，登录号分别为AY485826和AY450406。将lccFv的开放阅读框克隆到毕赤酵母表达载体pHBM906，转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母GS115 (pHBM565)诱导产酶，在培养温度20℃、甲醇流加量为1.0%(V/V)的情况下，其分泌表达的LCCFv的最高酶活为0.1070 U/mL，最适反应温度为45℃，最适反应pH值为3.9，在最适反应条件下其热稳定性和pH值稳定性均较好。
