摘要:源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别34bp的靶DNA序列loxP,进行位点特异性的重组反应。为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到具有不同抗性的两种不相容质粒中,然后将构建的原核表达载体pET30aCre和pET23bloxGFP电击共转化大肠杆菌L21(DE3),利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选。通过直接观察转化子的绿色荧光,便可以显示Cre酶的体内重组活性,并进一步通过SDSPAGE分析、质粒酶切鉴定进行了验证。结果表明:以gfp为报告基因、通过两种不相容质粒共转化大肠杆菌可以为研究和改进Cre/loxP重组系统提供一种简便直观的检测方法。