摘要:首次利用PCR_RFLP和测序分析对位于青藏高原腹地的青海三江源保护区高寒草甸土壤微生物固氮基因（nifH）的多样性和系统发育进行了探讨。在2个样地中，共得到143个阳性克隆，用限制性内切酶MspⅠ和RsaⅠ进行RFLP分析后得到35个不同的RFLP谱带型，多样性为24.5%，其中ZD样品中获得82个阳性克隆和21个不同的RFLP谱带型，多样性为25.6％，而YS样品中获得61个阳性克隆和19个不同的RFLP谱带型，多样性为311％，2个样地中有5个相同的RFLP谱带型。在各样地都发现一个明显的优势种群，ZD样地的明显优势种群占克隆数的293%，YS的优势种群占克隆数的328%。对21个克隆进行了部分序列的测定，序列的相似性在71％～98％之间，在GenBank数据库中没有发现完全匹配的序列，因此这些序列可能代表着新的固氮生物株系。最后利用Clustal W与Mega软件和已有序列构建了系统发育树，结果发现，21个序列分为4个不同的簇，大部分的克隆与Proteobacteria的3个系统发育亚簇（α、β和γ）具有较高的相似性，其中主要的序列都落在第一和第二簇内。YS样地中的优势种群与α_Proteobacteria中的Rhodobacter sphaeroides具有较高的相似性，而ZD样地中的优势种群则与β_Proteobacteria中的Delftia tsuruhatensis具有较高的相似性。
