摘要:制备丙型肝炎病毒（HCV）检测芯片并进行验证、初步检测质量评价。采用限制性显示（Restriction display， RD）技术制备芯片探针，从载体pCV_J4L6S中切出HCV全长cDNA，Sau3AⅠ酶消化，所得的限制性片段进行RD_PCR扩增，经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)结合银染法进行分离。切胶回收后作3次PCR，得到较纯净的HCV cDNA限制性片段。扩增后的产物克隆至pMD18_T载体进行快速鉴定。将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片进行杂交验证分析，对芯片检测进行优化、初步的质量评估。运用RD技术，得到24个200～800bp、大小均一的基因片段，序列分析表明，均属于HCV特异基因，可以作为诊断芯片探针；杂交、测序结果显示，芯片检测的敏感性、特异性、准确度、重复性、线性等指标均佳。利用RD技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法；制备的诊断芯片可以用于检测HCV RNA，具有敏感、检测结果较为可靠的优点。
