摘要:将克隆的亮白曲霉(Aspergillus candidus)乳糖酶基因lacb′插入到毕赤酵母(Pichia pastoris)高效表达载体pPIC9中，与分泌信号肽序列α_因子融合，通过同源重组将lacb′整合到酵母染色体上。通过SDS_PAGE检测和表达产物的酶活性筛选，得到重组转化子，证明乳糖酶获得有效分泌和高效表达。表达的乳糖酶为糖蛋白，表观分子量为130kD，脱糖基后的蛋白分子量下降为110kD。经过5Ｌ小罐高密度发酵，重组酵母中酶蛋白表达量为6mg/mL发酵液，每毫升发酵液中乳糖酶的活力为3600U，高于目前国内外报道的水平。进一步研究了表达产物的酶学性质，该酶最适pH为5.2，最适反应温度60℃，比活性为706.5±2.6U/mg，Km为1.7mmol/L，Vmax为3.3μmol/min。与米曲霉ATCC 20423的乳糖酶相比，该乳糖酶具热稳定性强、比活性高、pH范围宽等特点。
