疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶的纯化及其性质研究

摘要:

采用硫酸铵沉淀、DEAESepharose Fast Flow阴离子层析、PhenylSepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）几丁质酶。经SDSPAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在48～498kD之间。该酶反应的最适温度和最适pＨ分别为55℃和4.5，在pＨ4.5条件下，该酶在50℃以下稳定；65℃的半衰期为25ｍin；70℃保温20min后，仍保留24%的酶活性。其N端氨基酸序列为AQGYLSVQYFVNWAI。金属离子对几丁质酶的活性影响较大, Ca2+、Na+、K+、Ba2+对酶有激活作用；Ag+、Fe2+、Cu2+、Hg2+对酶有显著的抑制作用；以胶体几丁质为底物的Km和Vmax值分别为9.56mg/mL和2212μmol/min。抗菌活性显示，该酶对供试病原菌有不同程度的抑制作用。

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