牛分枝杆菌MPB51基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要:

以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板，以MPB51成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增，获得约800bp的DNA片段。通过TA克隆技术，将PCR产物克隆至pGEMT Vector中，成功地构建出克隆质粒pGEMT51。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEMT51和pET28a(+)，并将纯化的MPB51基因亚克隆至pET28a (+)中，构建出原核表达质粒pET28a51。将pET28a51转化至感受态E.coli BL21（DE3）中，经IPTG诱导和SDSPAGE分析，可见约30kD外源蛋白带。Western blot分析发现，该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性，从而为进一步研究MPB51的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。

Abstract: