苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关基因rstA在大肠杆菌中的高效表达及其产物的纯化

摘要:

苜蓿中华根瘤菌（Sinorhizobium meliloti）042BM与耐盐有关的19kb DNA片段含有两个开放阅读框，采用PCR方法分别将它们扩增，连接到穿梭质粒上，并进行了耐盐功能检测，证明其中的ORF2具有耐盐性，定名为rstA基因。将它分别克隆到表达载体pThioHisA、 B 和C上,构建成重组质粒pGSA、pGSB和pGSC，转化大肠杆菌(Escherichia coli)Top10后，经IPTG诱导，pGSA获得高效表达。表达蛋白占菌体总蛋白的36%，但大多数以包涵体形式存在。对表达产物依次进行ProBondTM树脂亲和纯化、饱和硫酸铵盐析，最后得到纯度为95%的融合蛋白。SDSPAGE显示纯化的蛋白质为分子量43kD的单一蛋白带，经Western blot检测证实了表达结果。

Abstract: