摘要:通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库，从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析，用BLAST分析表明，TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60％，故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因（GenBank登录号为AY623903）。将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上，得到重组质粒pHBM1201。经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母（Pichia pastoris） KM71、GS115、SMD1168，得到分泌表达的重组毕赤酵母。挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168_3在摇瓶中诱导产酶，对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明，其最适反应温度为55℃，最适PH值为7.5，以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U，半衰期为1h，在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77％下降到11％，温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上。
