摘要:伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)JT1500对2_萘酸(2_naphthoate)生物降解的关键步骤之一是通过2_萘酸加单氧酶羟化2_萘酸生成1_羟基_2_萘酸(1_hydroxy_2_naphthoate)。在已确定2_萘酸加单氧酶基因及其功能的基础上对含有该基因的一个4.8kb长度的基因簇进行了克隆测序。该序列上含有4个可能的阅读框orfB、orfC、orfD、orfA。序列比对发现，orfA序列与Japonicum USDA 110和 Ralstonia eutropha HF 39中的加单氧酶基因同源性较高，orfB序列与Bordetlla pertussis Tohama I、Ralstonia solanacearum GMI1000和Bordetella bronchiseptica RB50等菌中的黄素还原酶基因有一定的同源性。酶活分析发现只含基因orfA的重组大肠杆菌SA细胞提取液有很低的加氧活性，含基因orfB的重组子SB细胞提取液没有加氧活性，但在反应体系中同时加入SA和SB的细胞提取液后，其加氧活性显著增强，包含片段orfB+orfA的重组子SB+A 在黄素(FMN、FAD)存在的情况下也表现出很强的加氧活性；在厌氧条件下，能检测出SB细胞提取液的黄素还原活性。基于以上信息,认为2_萘酸加单氧酶基因簇含有两个重要的组分：黄素还原酶基因(nmoB)和加单氧酶基因 (nmoA)。2_萘酸加单氧酶Nmo羟化2_萘酸的过程为先由黄素还原酶(NmoB)在NADH存在的条件下将黄素(FMN、FAD)还原为还原型黄素(FMNH2、FADH2)，然后加单氧酶(NmoA)利用还原型黄素和O2羟化底物2_萘酸,生成1_羟基_2_萘酸。NmoB 是NmoA的偶联蛋白。
