摘要:首次构建了能表达犬冠状病毒纤突糖蛋白（CCV S1）的重组犬2型腺病毒(CAV_2)。用RT_PCR方法从CCV DXMV株细胞培养物中扩增出编码S糖蛋白A、B、C和D 4个抗原位点的基因片段S1，将其克隆到pVAX1中，然后将含有CCV S1基因的完整表达盒（CMV_S1_PolyA）进一步定向克隆到含有CAV_2 E3区的穿梭质粒pVAXE3中，构建出pVAX△E3S1。通过SalⅠ+NruⅠ双酶切pVAX△E3S1回收含有目的基因的表达盒，将其克隆入含有CAV_2全基因组的骨架质粒pPoly2_CAV_2中，获得重组质粒pCAV_2_CCV_S1。ClaⅠ+AscⅠ酶切pCAV_2_CCV_S1释放重组基因组，转染MDCK细胞，获得了重组病毒CAV_2_S1。该重组病毒在MDCK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变。通过mRNA水平和Western blot检测，证实重组病毒能表达CCV S1蛋白。动物免疫试验表明，该重组病毒可以有效地诱导免疫犬产生抗CCV和CAV_2抗体。
