采用PCR定点突变技术，通过重叠延伸法3次PCR扩增，扩增片段上含有所需要的突变位点，最后将扩增片段克隆入pcDNA3载体中，DNA测序表明在预期位点已经发生突变，HA基因裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF突变为RSSR↓GLF，通过磷酸钙共沉淀方法将HA基因突变体的重组质粒瞬时转染293T细胞，采用间接免疫荧光鉴定其表达情况。IFA证实突变后的HA在细胞膜上获得了有效表达。HA基因突变体的成功构建，为进一步研究该突变位点导致AIV进入细胞的发病机制和HA蛋白的结构和功能的关系奠定了基础。
刘华雷 魏建超 周斌 曹瑞兵 陈溥言. 禽流感病毒血凝素基因突变体的构建及其在293T细胞中的表达. 微生物学报, 2005, 45(4):
