一株高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建

摘要:

利用DNA体外重组技术，将大肠杆菌质粒载体pUM3上的抗砷基因簇片段亚克隆到含有强启动子（tac启动子）并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上，删除调节基因片段，构建了含有强启动子、可在tra基因诱动下转移的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性喜温硫杆菌Acidithiobacillus caldus中，构建了冶金工程菌Acidithiobacillus caldus (pSDRA4)，接合转移频率为（1.444±0.797）×10-4。表明在大肠杆菌和喜温硫杆菌之间成功地建立了一个遗传转移系统。经检测，重组质粒在喜温硫杆菌中具有较好的稳定性，在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定（重组质粒保留76% 以上）。经抗砷性能检测，与野生菌相比，构建的喜温硫杆菌工程菌抗砷能力明显提高，从10mmol/L提高到45mmol/L。

关键词:抗砷基因，喜温硫杆菌，接合转移，极端嗜酸性自养细菌

Abstract:

Key words:抗砷基因，喜温硫杆菌，接合转移，极端嗜酸性自养细菌