摘要:以猪A组轮状病毒mRNA为模板，应用反转录聚合酶链式反应（RT_PCR）技术，扩增了1194bp的Vp6基因，通过T_A克隆技术，将PCR产物克隆至克隆载体pGEM_T Vector中，构建克隆质粒pGEM_T_Vp6。用SacⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM_T_Vp6和以胸苷酸合成酶基因（thymidylate synthase, thyA）为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t，并将纯化的Vp6基因亚克隆至表达载体pW425t中，构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t_Vp6。将pW425t_Vp6转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中，经生长功能弥补筛选阳性克隆，通过SDS_PAGE分析，可见约44.88kD的融合蛋白。由Western blot分析，表明该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性，从而为pW425t_Vp6在乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。
