重组鸡γ_干扰素在昆虫细胞中的高效表达

摘要:

将鸡γ_干扰素(ChIFN_γ)基因克隆到载体pFASTBAC1中，构建转移载体pFASTBAC1_ChIFN_γ，然后转化DH10Bac感受态大肠杆菌，通过位点特异性转座，将ChIFN_γ基因整合到Bacmid穿梭载体中，构建表达质粒Bacmid_ChIFN_γ；通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞，用间接免疫荧光试验鉴定重组鸡γ_干扰素（rChIFN_γ）的表达；通过水泡性口炎病毒感染鸡胚成纤维细胞（CEF）的细胞病变抑制试验，检测rChIFN_γ的活性。研究结果表明，感染重组杆状病毒的Sf9细胞能高效表达rChIFN_γ，且当每个细胞的感染量为1个病毒时，细胞在感染96h后，rChIFN_γ基因表达产物的活性最高，达到10.6～10 7.2U/mL。 以rChIFN_γ进行对新城疫病毒(NDV) F48E8株、禽流感H5N1病毒（AIV_H5）和马立克氏病病毒 (MDV) GA株的抗病毒活性试验，发现rChIFN_γ对AIV_H5和MDV GA株病毒有明显的抑制其致细胞病变作用，但对NDV F48E8株病毒在体外不能抑制其致细胞病变作用，仅能在病毒滴度上表现抑制效果。

关键词:重组鸡γ_干扰素，杆状病毒，表达，抗病毒作用

Abstract:

Key words:重组鸡γ_干扰素，杆状病毒，表达，抗病毒作用