摘要:二氧化硫在啤酒中具有抗氧化的重要功能，而在其形成过程中APS激酶（MET14编码）起着非常重要的作用。以二氧化硫产量较高的青岛啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）YSF5的总DNA为模板，用PCR方法克隆得到MET14基因。为使目的基因在酿酒酵母中表达，以大肠杆菌酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体， 以PGK1强启动子为调控元件，构建了重组表达质粒pPM, 并转化酿酒酵母YS58。转化子在YNB添加亮氨酸、组氨酸和色氨酸的选择性培养基上筛选鉴定，盐酸副玫瑰苯胺法测得转化子的SO2产量是受体菌的2倍左右。在重组表达质粒pPM的基础上添加铜抗性标记基因构建了重组表达质粒pCPM, 并转化青岛啤酒工业酵母菌株YSF38，转化子在YEPD+4mmol/L CuSO4的选择性培养基上筛选鉴定，实验室条件下培养后，测得转化子YSF38(pCPM)的SO2产量是受体菌的3.2倍。用该转化子在青岛啤酒厂进行小型发酵实验，结果表明在发酵结束时，YSF38(pCPM) 转化子的SO2产量是受体菌的1.4倍。因此，MET14基因的有效表达可以提高啤酒工业酵母的SO2 产量。
