核盘菌arom基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

摘要:

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）arom基因已经被克隆、测序。该基因编码的AROM蛋白是芳香族氨基酸合成途径中催化第二步到第六步的五功能多肽。为了对扩增的核盘菌arom基因进行功能验证和探索大量获得AROM蛋白的成熟方法，克隆了arom基因的编码框序列，并将其与载体pYES2连接，构建了酵母表达载体pYES2arom。用LiAc/SSDNA/PEG方法将该表达载体转入酿酒酵母H158（Saccharomyces cerevisiae H158）中。酶活测定、RTPCR和Northern杂交结果显示，核盘菌arom基因在酿酒酵母胞内获得了表达，转化子具有AROM蛋白结构域之一5烯醇丙酮酰莽草酸3磷酸合酶的催化活性。不同培养时间取样样品的酶活检测结果表明，当转化子在30℃的条件下，在SCU酵母尿嘧啶营养缺陷型选择培养基中以180r/min被振荡培养时，其外源AROM蛋白的5烯醇丙酮酰莽草酸3磷酸合酶酶活在培养72h达到最高。

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