摘要:选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Shandong/093/2004株作为骨架病毒，在完成了全基因组序列测定基础上，设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接，构建A/SD/04的8个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒： 241、242、243、244、245、246、247 和248。A/SD/04的8质粒与PR8（H1N1）进行不同组合的拯救，获得8个均含A/SD/04 HA基因的H5重组流感病毒。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价在28～2 10，EID50在10-8.5～10-9之间，MDT 在34～46h之间，均与野生A/SD/04（wt A/SD/04）相似。重组病毒对6周龄的SPF鸡的静脉接种指数（IVPI）与wt A/SD/04却有明显的差异，说明不同组合的内部基因影响病毒对鸡的致病力，但不影响病毒的鸡胚致死能力、对鸡胚的感染能力和病毒在鸡胚中的繁殖能力。构建的A/SD/04的8个质粒拯救系统，为H5N1的基因功能研究和新型疫苗开发奠定基础。
