雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

摘要:

根据真菌Δ6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RTPCR，得到雅致枝霉（Thamnidium elegans） As32806Δ6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列，然后通过快速扩增cDNA末端技术（RACE）向两端延伸得到1504bp的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对，具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体 pYTED6，并在酿酒酵母INVSc1中异源表达。通过气相色谱（GC）和气相色谱/质谱（GCMS）分析表明，该序列在酿酒酵母中获得表达，产生γ亚麻酸（GLA）的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ亚麻酸，是一个新的有功能的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因（GenBank,AY941161）。

Abstract: