摘要:研究大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin，Ecs)融合蛋白的发酵和纯化工艺。将Ecs基因插入表达载体pTXB1，转化E.coli BL21(DE3)构建工程菌。对工程菌进行补料分批培养并诱导表达，研究培养基、培养和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响，几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白，经DTT裂解后，检测Ecs活性。发酵后菌体湿重可达75g/L，融合蛋白表达量约占总蛋白的35%，重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。亲和层析纯化后，得到Ecs单体，得率为28mg/L发酵液。生物学活性分析显示，重组Ecs能有效抑制血小板的聚集，其活性与天然Ecs相似。优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和纯化条件，为规模化生产奠定基础。
