马动脉炎病毒GL蛋白主要抗原域的表达及间接ELISA的初步建立

摘要:

在分析马动脉炎病毒GL蛋白抗原性的基础上，设计一对引物克隆GL蛋白一段抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因插入pET32a的BamHⅠ和XhoⅠ之间构建了GL蛋白主要抗原域原核表达载体pETGL1。将pETGL1质粒转化BL(21)宿主菌后，对培养和表达条件进行了优化，实现了EAV GL蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组EAVGL1蛋白，以纯化的重组GL1蛋白作为检测抗原，初步建立了检测马动脉炎病毒抗体的iGL1ELISA。结果表明，抗原的最佳包被浓度为965μg/mL，血清的最佳稀释度为1∶80，阳性标准初步定为：待检血清OD490＞0.4, 且待检血清OD490 /阴性血清OD490＞2。应用iGL1ELISA对马血清样品进行检测，结果表明iGL1ELISA与病毒中和试验的符合率达到94.1%，与国外同类试剂盒的符合率达到95.6%

Abstract: