摘要:以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板，利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列，测序分析后提交GenBank，登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点，将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK，插入片段置于该载体中mpd基因的上游，并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK)，在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下，mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达，表达产物结合在细胞膜上；发酵液在48h酶活达到最高值779U/mL，是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。
