摘要:为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因，寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者，应用体内表达技术，以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因galU作为体内报告基因，利用其缺陷体不能合成荚膜多糖，从而不能在宿主体内存活的特点，筛选鉴定肺炎链球菌体内诱导基因。首先，把肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段（200～500bp）克隆到含有体内、体外双重报告基因（galU_lacZ）的报告载体pEVP3_galU的BglⅡ位点，将获得的质粒库转化肺炎链球菌galU缺陷菌株，得到肺炎链球菌体内启动子诱捕文库，将此文库去感染BALB/c小鼠，经过两轮体内筛选，在涂布有X_gal的TSA血清平板上得到了165个白色菌落，对插入的随机片段进行测序及生物信息学分析，共证实15个不同的体内诱导基因片段， 8个为单独的ORF，7个为含有多个ORFs的操纵子结构，它们分别参与细菌在宿主体内的定植与粘附、能量代谢、物质转运、转录调节、DNA复制与重组、细胞壁合成等，另外还包括功能不明的假想蛋白。其中部分ORFs可能与细菌毒力相关，可以作为候选疫苗和药物的靶标。
