摘要:以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）体内的总RNA为模板，通过RT_PCR方法扩增含自身信号肽的蚓激酶基因F238，将其克隆到pUCm_T载体上，并进行测序。GenBank登录号为：DQ202401。测序结果表明基因全长为738bp，共编码245个氨基酸，包括7个氨基酸的信号肽序列和238个氨基酸的成熟肽序列。与粉正蚓（Lumbricus rubellus）F_III_2相比，核苷酸与氨基酸序列的同源性均为99%，仅存在2个碱基的差异，导致2个氨基酸的突变。通过生物信息学方法对蛋白质的理化及结构特性进行分析预测，F238的等电点为4.61，含有11个半胱氨酸，形成3个二硫键。蛋白质分子主要由β折叠组成，具有丝氨酸活性中心，属丝氨酸蛋白酶超家族胰蛋白酶类。以重组质粒pUCm_T_F238为模板，通过PCR方法扩增去信号肽的蚓激酶基因F238_m，构建毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9_F238_m，将其线性化后用电穿孔法导入酵母宿主菌GS115中。在MM和MD平板上筛选表型，经甲醇诱导后，SDS_PAGE分析显示表达产物的分子量为28kDa左右，纤维平板法测定活力最高可达100U/mL。
