摘要:利用PCR技术，从A型产气荚膜梭菌标准株染色体DNA中扩增出α毒素基因，构建了含α毒素基因的重组菌株BL21(DE3)(pXETA02)。经酶切鉴定和序列测定证实，构建的表达质粒pXETA02含有α毒素基因序列。经SDSPAGE、Western blot分析和ELISA检测，重组菌株表达的α毒素蛋白能够被α毒素单抗识别。表达优化结果表明，以IPTG为诱导剂诱导α毒素表达的优化条件是：培养基pH 75，培养温度37℃，IPTG浓度0.8mmol/L，菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG，诱导时间5h，此时α毒素蛋白表达量为34.83%。以乳糖为诱导剂诱导α毒素表达的优化条件是：培养基pH7.5、培养温度37℃，乳糖浓度0.1g/L，菌体生长密度OD600达到0.8时加入乳糖，诱导时间5h，α毒素蛋白表达量为23.82%。动物实验结果表明，用重组菌株α毒素蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57.1毒素攻击。
