高温α-淀粉酶基因突变体在大肠杆菌、毕赤酵母中的表达

摘要:

对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)高温α淀粉酶 (amyE) 基因进行改造获得的基因突变体(amyEM)，通过PCR 扩增, 将此基因分别克隆至大肠杆菌表达载体pBV220和毕赤酵母表达载体pPIC9K上,并分别转化大肠杆菌DH5α和毕赤酵母GS115感受态细胞，获得重组大肠杆菌和重组毕赤酵母。 通过表达产物的酶活性检测和SDSPAGE分析，证明突变α淀粉酶(AmyEM)在大肠杆菌、毕赤酵母中获得有效表达。对重组大肠杆菌产生的α淀粉酶的粗酶性质分析表明，此酶分子量约为55kDa。其最适反应温度为80℃～90℃，与野生型基因相比，其最适pH均为6.0，但不同的是突变体在pH 5.0～5.5时表现出较高的酶活力；在毕赤酵母细胞的表达产物可分泌至胞外。由于酵母可对蛋白进行糖基化，酶分子量增加到60kDa，最适pH 也改变为5.5。此高温α淀粉酶突变体所具有的在微酸性环境具有较高酶活力的性质，具有重要的潜在工业应用价值。

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